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基因重组质粒、基因重组毕赤酵母及秸秆纤维脱胶应用: 本发明涉及一种基因重组质粒、基因重组毕赤酵母及秸秆纤维脱胶应用，属于可再生资源利用技术领域。所述基因重组质粒包括从上游至下游依次连接的组成型启动子、核糖体结合位点、第一信号肽基因修饰的果胶降解酶基因、终止子、第一酸敏感型...; 樊昌鑫裘豪王博涵霍修楠石家诚梁元浩张东方占艺谢尚县闫云君宁康

一种促进肿瘤细胞空洞的shRNA转基因重组质粒及其应用: 本发明提供了促进肿瘤细胞空洞的shRNA转基因重组质粒及其应用，转基因重组质粒是将shRNA表达基因插入AAV2质粒中，shRNA表达基因的核苷酸序列为SEQ ID NO.1；的shRNA转基因重组质粒在制备抗肿瘤药物中...; 石寒菡韩明磊柴佩韦贾仁兵文旭洋范佳燕范先群

以S基因重组质粒为模板的HDA检测新型冠状病毒核酸的方法: 本发明公开了一种以S基因重组质粒为模板的HDA检测新型冠状病毒核酸的方法，本发明在建立的解旋酶依赖性等温扩增荧光检测方法的基础上，利用解旋酶依赖性等温扩增荧光检测技术建立新型冠状病毒核酸的新方法，能实现对新冠病毒快速、灵...; 滕新栋刘迪张瑾贺骥

猪萨佩罗病毒VP1基因重组质粒实时荧光定量PCR标准曲线的建立: 2024年; 为建立用实时SYBRGreenI荧光定量PCR方法检测PSVVP1基因表达量的标准曲线,试验根据目的基因在NCBI上CDS区的序列设计合成引物,用T4连接酶将目的片段与pMD18-T载体连接,构建重组质粒,采用real-time RT-PCR的检测方法,建立了检测猪萨佩罗病毒VP1基因表达量的标准曲线。试验结果显示,线性回归系数为0.9981,且熔解曲线只有一个峰值,表明由VP1目的基因所建立的标准曲线线性关系良好。试验成功建立了用SYBRGreenI荧光定量RT-PCR方法检测猪萨佩罗病毒VP1基因表达量的标准曲线,为后续检测基因表达量的变化奠定了基础。; 刘熠凡张静雯王平利; 关键词：PSV 重组质粒实时荧光定量PCR

基因重组质粒、基因重组毕赤酵母及秸秆纤维脱胶应用: 本发明涉及一种基因重组质粒、基因重组毕赤酵母及秸秆纤维脱胶应用，属于可再生资源利用技术领域。所述基因重组质粒包括从上游至下游依次连接的组成型启动子、核糖体结合位点、第一信号肽基因修饰的果胶降解酶基因、终止子、第一酸敏感型...; 樊昌鑫裘豪王博涵霍修楠石家诚梁元浩张东方占艺谢尚县闫云君宁康; 文献传递

H5亚型2.3.4.4分支禽流感病毒HA基因重组质粒的免疫保护效力研究被引量：2: 2022年; 为研制H5亚型禽流感病毒(AIV)流行株的DNA疫苗,本研究将目前流行的H5亚型2.3.4.4分支AIV代表株A/Duck/Guizhou/S4184/2017(H5N6)[简称DK/GZ/S4184/2017(H5N6)]的HA基因经密码子优化后克隆至载体pCAGGs中构建重组质粒pCA-S4184,经PCR和测序鉴定正确后转染293T细胞,利用间接免疫荧光试验和western blot鉴定。结果显示,该HA基因可以在293T细胞中瞬时表达。将15μg/只的重组质粒pCA-S4184经肌肉注射免疫3周龄SPF鸡,3周后以相同的剂量加强免疫,1周后再通过滴鼻途径分别以10^(5)EID_(50)/0.1 mL/只的同源高致病性AIV(HPAIV)DK/GZ/S4184/2017(H5N6)株和同分支异源HPAIV DK/GD/S1110/2019(H5N6)、DK/GX/1/2018(H5N6)、DK/HuN/SE0110/2018(H5N6)株攻毒,首免及攻毒后每周采血,检测每组鸡的HI抗体水平。在攻毒后14 d的观察期内每天记录各组鸡的发病和死亡情况,攻毒后第3 d、5 d和7 d采集所有鸡的喉头和泄殖腔拭子进行病毒的分离及其滴度的测定。结果显示,加强免疫后各组鸡的平均HI抗体滴度为1:8~1:11,攻毒后HI抗体效价均显著增加;pCA-S4184可以对SPF鸡提供抵抗致死性同源病毒和同分支异源病毒攻击的能力,保护率达到100%,且能显著降低SPF鸡的排毒量甚至不排毒。随后以15μg/只的pCA-S4184两次免疫3周龄SPF鸡,免疫后每隔2周采血检测HI抗体的动态消长规律并在首免后第12周和24周,分别随机选取8只免疫鸡和8只对照鸡通过滴鼻途径以10^(5)EID_(50)/0.1 mL/只感染同源HPAIV DK/GZ/S4184/2017(H5N6)株,并在攻毒后第3 d、第5 d和第7 d采集所有鸡的喉头和泄殖腔拭子,分离病毒并测其滴度,以评估该重组质粒在免疫持续期间所诱导的免疫保护效果。结果显示,重组质粒仍可以使免疫鸡完全抵抗同源病毒的攻击。本研究为重组质粒pCA-S4184作为防控H5亚型2.3.4.4分支禽流感的候选DNA疫苗提供了实验依据。; 李炯颉梁真洁陈普成曾显营柳金雄邓国华姜永萍陈化兰; 关键词：DNA疫苗禽流感病毒

野生型及突变型人Toll样受体23'非编码区基因重组质粒的构建及鉴定: 2022年; 目的构建野生型及突变型人Toll样受体2(Toll-like receptor 2,TLR2)3'非编码区(3'UTR)基因重组质粒,并进行鉴定。方法提取293T细胞基因组DNA,以其为模板进行PCR扩增,获得TLR2的3'UTR基因片段,连接至载体pmiR-RB-REPORTTM,转化感受态E.coli DH5α,于LB(Amp+)固体培养基中培养过夜,菌落PCR筛选阳性克隆,并测序。根据TLR23'UTR与miR-122的预测结合靶点,设计突变型TLR23'UTR扩增引物,以构建的野生型TLR23'UTR重组质粒为模板,PCR扩增突变序列,相同方法进行载体连接及转化,挑取菌落,测序。结果野生型TLR23'UTR重组菌经菌落PCR鉴定,可见1000 bp的目的基因片段,大小与预期相符;测序结果表明,插入序列与TLR23'UTR序列完全一致。突变型TLR23'UTR重组质粒测序鉴定结果表明,靶序列CACTCC已更改为GTGAGG。结论成功构建了野生型及突变型人TLR23'UTR重组质粒,本实验为TLR2功能的深入研究提供了实验依据。; 包丽丽孙传凯李晓玫任向宇殷兆丽孙晓琳福泉纳仁高娃; 关键词：TOLL样受体2 基因重组

非洲猪瘟病毒I177L基因重组质粒、表达载体及制备方法: 本发明提供了非洲猪瘟病毒I177L基因重组质粒、表达载体及制备方法。所述制备方法，包括步骤：向I177L基因两端添加NotⅠ和EcoRⅠ酶切位点后，连入经NotⅠ和EcoRⅠ双酶切的pMAL‑c5X载体中，得到重组质粒p...; 黄淑坚曾繁聪陈耀杨惠湖罗瑞柯骏鸿姜含雨谢梓民; 文献传递

柔嫩艾美耳球虫gam22基因重组质粒的免疫原性及保护效果: 2021年; 为了评价重组质粒pSMART2b-Etgam22抗柔嫩艾美耳球虫的保护效果,本试验用PCR扩增获得Etgam22基因后连接至pSMART2b载体以构建重组质粒pSMART2b-Etgam22,用Western Blot分析重组质粒pSMART2b-Etgam22在293T细胞中的表达情况,用重组质粒pSMART2b-Etgam22免疫雏鸡,并检测抗体水平和细胞因子分泌情况,随后用柔嫩艾美耳球虫卵囊感染免疫的雏鸡,观察死亡情况,检测体重变化、卵囊数量、盲肠病变,通过抗球虫指数评价pSMART2b-Etgam22对柔嫩艾美耳球虫感染的保护效果。结果显示,本试验成功构建了重组质粒pSMART2b-Etgam22;Western Blot分析表明,该重组质粒可在细胞中表达融合蛋白,表达蛋白可被抗柔嫩艾美耳球虫阳性血清识别。与未免疫感染组相比,pSMART2b-Etgam22免疫雏鸡显著提升了抗体水平(P<0.01)及IL-2和IFN-γ分泌(P<0.01),显著增加了体重(P<0.01),显著减少了卵囊排出数量(P<0.05),显著减轻了盲肠病变(P<0.05)。根据存活率、相对增重率、盲肠病变计分、卵囊值计算得出的抗柔嫩艾美耳球虫指数为165。结果表明,pSMART2b-Etgam22具有良好的抗柔嫩艾美耳球虫保护效果。; 董青董青李新王晓岑李建华; 关键词：柔嫩艾美耳球虫抗球虫指数免疫原性

一种嵌合人胰岛素和白介素-10双基因重组质粒载体及其构建方法: 本发明公开了一种嵌合人胰岛素和白介素‑10双基因共表达重组质粒载体及其构建方法。其步骤包括（1）设计合成Insulin‑PGK‑IL10目的基因。（2）设计并合成引物，扩增目的基因片段，双酶切后回收酶切产物。（3）对质粒...; 赵振林; 文献传递

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