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- 郭苗苗冯欢吴红龙
- 秦岭放线菌H2S5基因组文库构建与安莎霉素生物合成基因簇的异源表达
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- 高花花
- 关键词：细菌人工染色体异源表达生物合成基因簇
- 一种人线粒体基因组文库构建的方法及应用
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- 冀延春管敏鑫蒋萍萍高应龙毛琴
- 福尔马林固定石蜡包埋样本全基因组文库构建流程优化
- 2020年
- 目的优化建立适合本实验室针对人源福尔马林固定石蜡包埋(Formalin-Fixed and Paraffin-Embedded,FFPE)样本的全基因组(Genomic DNA,gDNA)文库构建方案。方法探讨并设计了在FFPE全基因组文库构建各环节优化条件,分析比较FFPE DNA文库片段大小及文库转化率,以选择最优的文库构建流程。结果最终确定DNA起始量50 ng、20 min片段化酶切时间,采用4×稀释的接头进行20 min连接,经过2次特定比例的磁珠筛选方案进行文库构建,实现片段主峰在300 bp^400 bp左右,文库转化率达60%。结论本操作流程针对FFPE样本可以保证高质量的文库构建,同时实现较高文库转化效率。
- 欧小华刘菲菲毛琳琳周丹燕胡昌明胡昌明
- 关键词：全基因组文库
- 一种人线粒体基因组文库构建的方法及应用
- 本发明提供一种人线粒体基因组文库构建的方法及应用。针对线粒体基因组的特点，对新旧样本采用两段法来扩增整条线粒体DNA；具有重叠特性的两条线粒体DNA扩增引物把线粒体全长扩增，增加其保真性，然后3个反应池的多重PCR所需要...
- 冀延春管敏鑫蒋萍萍高应龙毛琴
- 土壤微生物宏基因组文库构建及聚酮合酶基因的筛选
- 2018年
- 土壤中包含丰富的聚酮合酶(PKS)生物合成基因簇,其编码合成的聚酮化合物具有抑菌、抗病毒、抗肿瘤等多种生物活性,在食品、医药、化工等领域具有广泛的应用。为发现新型PKS基因,本研究采用宏基因组技术,以采自大连地区的土壤为研究对象,构建土壤宏基因文库,分别根据Ⅰ型PKS和Ⅱ型PKS结构域保守序列设计探针,PCR靶向筛选到4个含有PKS基因的单克隆,经测序与构建系统发育树分析,发现这4个单克隆的PKS基因分别单独聚为一支,与已知菌株编码的聚酮化合物亲缘关系较远,提示这些单克隆具有合成结构新颖聚酮化合物的潜力。本研究结果拓展了天然产物的开发利用途径,为新型聚酮化合物的发掘以及新药的获得提供了新思路。
- 杨雨蒙徐敬国胡伊旻史雅凝辛志宏
- 关键词：土壤聚酮合酶
- 成都平原蜘蛛内生菌宏基因组文库构建及新型青霉素酰化酶的初步筛选
- 2017年
- 蜘蛛是一类种类繁多、数量庞大、分布广泛的捕食性动物(新发现的名为Bagheera kiplingi的跳蛛除外)。超过60%的蜘蛛感染了各种内生菌。内生菌在调节蜘蛛生长、繁殖、传播、防御等方面有重要作用。蜘蛛及其内生菌蕴含着极其丰富的次级代谢产物和各种酶学资源,国内外关于这方面的研究还不多。在前期蜘蛛内生菌菌群调查的基础上(工作另文发表),本研究构建了蜘蛛内生菌宏基因组文库,并从中筛到一段核心序列(NCBI登录号:KX115406),该序列与Pseudomonas mosselii SJ10菌株编码的青霉素G酰化酶(EC.3.5.1.11)序列部分同源。序列分析表明这很可能是一种新型青霉素酰化酶。
- 谢超颖殷海兴潘月李进军王辂苟小军
- 关键词：宏基因组文库青霉素酰化酶
- 双孢蘑菇不同交配型同核不育单孢的基因组文库构建被引量：1
- 2017年
- 对24个双孢蘑菇不育单孢进行两两杂交配对,以菌株9608为基准,获得了2种不同交配型的不育单孢菌株A+:9601、9608、9609、9612、AgQG841-1、AgLH830-4、AgLH830-6、AgQL8125-5;A-:9602、9603、9604、9607、Ag2k811-1、M7206-1、M7206-2、M7206-11、M7206-13。将这2种菌株进行DNA提取,并构建DNA文库,对文库进行酶切验证,用SalⅠ酶切,可切出20、14、9kb等3个片段,其中20、9kb为λ载体的左右臂,插入片段为14kb,与预期相符,说明文库的质量较高。
- 蔡志欣陈美元廖剑华李洪荣郭仲杰王泽生
- 关键词：双孢蘑菇交配型因子基因组文库
- 双胞胎儿童牙菌斑宏基因组文库构建
- 2014年
- 目的：摸索构建口腔牙菌斑宏基因组文库的条件，为从口腔牙菌斑基因组中筛选耐酸基因奠定基础。方法：采用改进的SDS方法提取牙菌斑总DNA，用BamHI限制性内切酶部分酶切基因组DNA，以质粒pUC18为载体，转入大肠杆菌DH5α中。结果：最终构建了1对双胞胎儿童的两个宏基因组文库，文库白斑率达到90％，两个文库的克隆子均在1000个左右，文库质量检测重组率达到85．5％，插入片段大小集中在1．5～10kb之间。结论：从文库的白斑率、重组率和插入片段大小可以看出文库的质量较好，这为后续从文库中筛选新的耐酸基因奠定了良好的基础。
- 谢灵芝陈泳杏李宇红陆剑相艳杜民权
- 关键词：牙菌斑宏基因组文库
- 鸟分枝杆菌的分离鉴定及其基因组文库构建被引量：2
- 2014年
- 目的:构建鸟分枝杆菌基因组文库。方法:利用16S rRNA基因测序法对15例HIV/AIDS患者痰分枝杆菌培养阳性标本进行菌种鉴定,分离出鸟分枝杆菌。鸟分枝杆菌基因组DNA和pUC19载体经同尾酶Sau3AⅠ和Bam HⅠ分别酶切后连接,连接产物转化大肠杆菌JM109而获得文库。通过计算文库滴度、酶切分析克隆子来评价文库质量。结果:15株分枝杆菌经鉴定,有9株结核分枝杆菌、4株鸟分枝杆菌和2株脓肿分枝杆菌。所构建鸟分枝杆菌基因组文库滴度为2.58×105cfu/ml。随机挑选9个克隆进行Bam HⅠ酶切分析,可见到插入片段大小约在0.5kb^1kb之间。结论:从HIV/AIDS患者中分离出鸟分枝杆菌,并成功构建了鸟分枝杆菌基因组文库,为研究鸟分枝杆菌致病基因的结构和功能提供了基础。
- 姚奇王爱妍凌敏
- 关键词：基因组文库
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