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- 周一鸣张梦丽王健辉王宪华全旭辉
- 噬菌体展示新冠病毒衣壳蛋白及应用
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- 白晓康叶其壮肖利群
- 基于噬菌体展示技术醛固酮特异性抗体的筛选
- 2024年
- 目的利用噬菌体展示技术及重组抗体构建技术筛选出特异性醛固酮(ALD)抗体,为ALD诊断试剂盒的研发提供原材料。方法取5只健康清洁级新西兰大白兔,将抗原ALD-血蓝蛋白(KLH)稀释至2 mg·L^(-1),采用背部多点注射方法对5只新西兰大白兔进行首次免疫,免疫剂量为每只1 mg;每隔2周进行1次免疫,且免疫剂量减少50%;从第3次免疫开始,每次免疫1周后采集大白兔耳缘静脉血,使用包被0.25 mg·L^(-1) ALD-BSA抗原的化学发光板,采用间接法和竞争法测定血清滴度;第5次免疫后选取血清效价高、特异性好的大白兔,取其脾脏和骨髓等组织。将脾脏组织研磨,采用TRIzol试剂一步法提取RNA,获取轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)基因序列。通过连接肽连接成单链片段(ScFv)并构建至噬菌粒载体Pcomb3xss中;然后,通过电转化方法将其导入大肠杆菌TG1,完成ALD ScFv噬菌体展示库构建。对文库进行3~5轮富集筛选,并挑取单克隆进行噬菌体上清制备,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)竞争法鉴定后送测,获得高竞争性克隆序列;将筛选得到的克隆序列插入至pCMV3表达载体,提取质粒后使用瞬时转染方法进行HEK293细胞转染;1周后,收取上清,应用亲和层析纯化及十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)电泳鉴定其纯度及表达量。结果5只大白兔在第5次免疫后,间接法检测其血清效价结果显示,4#、5#大白兔血清在稀释32000倍后,效价仍>10000。竞争法检测结果显示,5#大白兔血浆样本低值与高值的比值为2:1,优于其他大白兔。选取5#大白兔进行噬菌体文库构建。使用常规聚合酶链反应扩增出VL及VH基因片段,经搭桥拼接成ScFv(VL+VH)后,琼脂凝胶电泳分析可看到750 bp左右大小条带,与最初设计的片段大小一致。ScFv经酶切连接电转至大肠杆菌TG1中,构建一个库容为4.73×10^(8) cfu·mL^(-1)的噬菌体文库。经3轮淘洗出库平皿挑取300个
- 王素娟田晓平赵巧辉王天云
- 关键词:噬菌体展示
- 一种基于天然环肽骨架构建噬菌体展示环肽库
- 提供了一种基于天然环肽骨架构建的噬菌体展示环肽库。本发明涉及噬菌体展示的环肽库,其中环肽包含X<Sub>p</Sub>CC‑X<Sub>n</Sub>‑C‑X<Sub>m</Sub>‑CX<Sub>q</Sub>所示的氨...
- 周莉田长麟孙德猛曹秀秀王涛
- 一种通过噬菌体展示获得胶原蛋白抗体的方法
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- 冷毅斌兰萍胡治勇辛玥
- 一种获得双特异抗体的噬菌体展示库淘选方法
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- 张军锋郭志刚
- 全人源单域抗体噬菌体展示抗体库及其构建方法
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- 张军锋郭志刚
- 一种基于LSDV噬菌体展示文库筛选的蛋白质及其应用
- 本发明公开了一种利用LSDV噬菌体展示文库高通量、无偏见筛选到的LSDV抗原蛋白,其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示,编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明首先构建了展示LSDV的噬菌体文库,接着...
- 陶攀郭爱珍董俊花袁歆玮张谦赵慧
- 基于噬菌体展示技术的一类脑动脉瘤特异性多肽
- 本发明公开了基于噬菌体展示技术的一类脑动脉瘤特异性多肽,具体包括以下步骤:S1、筛选阶段:将15例脑动脉瘤患者血清、10例年龄相匹配的健康人血清,与噬菌体随机肽展示库进行淘选,通过二代测序和数据分析的筛选方法得到具有识别...
- 郑树法康德智姚培森
- 基于噬菌体展示技术和纳米材料的电化学发光生物传感方法
- 本发明公布了一种基于噬菌体展示技术和纳米材料的电化学发光生物传感方法。该方法涉及磁微球、捕获探针、噬菌体展示抗体或亲和体以及标记纳米材料等主要原料,构建了“捕获探针‑待测物‑噬菌体展示抗体/亲和体‑标记纳米材料”的夹心检...
- 刘帅童朝阳刘冰王金玉闫增元王爱红方凯
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