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一种提高重组N-乙酰葡糖胺转移酶IVa可溶性表达的方法
本发明公开了一种提高重组N‑乙酰葡糖胺转移酶IVa可溶性表达量的方法,首先构建了截短型N‑乙酰葡糖胺转移酶IVa(GnT‑IVa‑Δ87),并以质粒pET28a为载体,MBP为蛋白标签,构建得到重组表达质粒pET28a‑...
王宁彭森林项梦海
分子伴侣TF在促进A型塞内卡病毒结构蛋白VP2可溶性表达中的应用
本发明涉及分子生物学技术领域,具体涉及一种分子伴侣TF在促进A型塞内卡病毒结构蛋白VP2可溶性表达中的应用。本发明首先以SVA CH/FJ/2017毒株基因序列为基础,构建SVA VP2蛋白重组表达质粒pET28a‑SV...
郑海学茹毅杨锐郝荣增李亚军杨洋张贵财任蕊芳毛玉涵张越卢炳洲
一种显著提高马源酰化酶在毕赤酵母中可溶性表达的方法
本发明属于生物技术领域,公开一种提高马源酰化酶在毕赤酵母中可溶性表达的方法。本发明在不改变氨基酸种类的前提下,通过优化马源酰化酶的N端核酸序列,意外发现了可显著提升猪酰化酶可溶性表达的方法,同时显著提高了其酶活,酶活提高...
潘硕孟翔宇李瑞琦何利中
TEV蛋白酶及其在大肠杆菌中可溶性表达的方法
本发明公开了TEV蛋白酶及其在大肠杆菌中可溶性表达的方法,包括重组质粒的构建,培养重组质粒并向培养体系中添加IPTG进行诱导培养,诱导重组菌表达TEV酶,得到诱导后菌体;将诱导后菌体重悬破碎后并通过镍柱进行纯化;随后通过...
王航孙晓梅尹鸿萍韩耀超李林玥陈乐彤
一种提高非核糖体肽合成酶在大肠杆菌中可溶性表达的方法
本发明公开了一种提高非核糖体肽合成酶在大肠杆菌中可溶性表达的方法,所述方法是在非核糖体肽合成酶的N端或C端连接聚离子短肽标签;本发明通过在产脱羧肌肽的非核糖体肽合成酶ebony与磷酸激酶Sfp以连接肽GSG构成的融合蛋白...
柳志强俞梦莹赵嫚郑裕国
SUMO蛋白和高亲和PDGFβR肽共修饰的Bak BH3可溶性表达条件优化
2025年
目的优化小分子泛素相关修饰物(Small ubiquitin-related modifier,SUMO)和高亲和血小板衍生生长因子β受体(Platelet-derived growth factorβreceptor,PDGFβ)的短肽Z PDGFβR共修饰BAK蛋白的功能域多肽BH3,即融合蛋白SUMO-Z-BH3的可溶性表达条件。方法在不同浓度的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷浓度(0.1、0.3、0.6和1 mmol/L IPTG)、不同的诱导温度(16℃、20℃和37℃)以及不同的诱导时间(20 h、16 h和6.5 h)下,对含重组质粒pET28a/SUMO-Z-BH3的大肠杆菌Rosetta进行诱导表达。利用SDS-PAGE技术分析SUMO-Z-BH3的可溶性表达情况。结果在16℃,0.1 mmol/L的IPTG诱导20 h,SUMO-Z-BH3表达约占上清总蛋白的13.0%;在20℃,0.1 mmol/L的IPTG诱导16 h,SUMO-Z-BH3表达约占上清总蛋白的8.5%;在37℃,不同浓度的IPTG诱导后,上清中SUMO-Z-BH3的表达水平无明显差异,且表达量相对较低。结论融合蛋白SUMO-Z-BH3的最佳可溶性表达条件为16℃,0.1 mmol/L的IPTG诱导20 h,为后续的功能研究打下坚实的基础。
许云婷徐黎明刘妍王小花
关键词:可溶性表达
猪干扰素α的原核可溶性表达及抗PEDV活性
2024年
旨在利用原核表达系统高效表达具有抗病毒活性的可溶性重组猪干扰素α(soluble recombinant porcine interferon-α,srPoIFN-α)。通过PCR方法扩增姜曲海猪IFNα基因成熟肽序列,将其分别克隆至原核表达载体pCold-Ⅱ、pET22b、pET30a和pET30a-ELP中并在大肠杆菌中进行表达;通过Western blot结合Image J软件或BCA定量分析不同表达载体、密码子偏好优化、培养基类别、纯化方式等因素对猪干扰素α基因在大肠杆菌中可溶性表达的影响,鉴定提高srPoIFN-α表达的有利因素;利用VSV-GFP和PEDV检测srPoIFN-α的抗病毒活性。结果显示,原核表达载体pET30a、密码子优化、HB-PET自诱导培养基和磁珠纯化均能显著提高srPoIFN-α产量(P<0.001);srPoIFN-α有效抑制VSV-GFP复制的稀释倍数为2-8.1,与重组人干扰素α2b标准品的比活为1.71×10^(8)IU/g,有效抑制PEDV复制的稀释倍数为2^(-10.29),抗PEDV活性为2.72 IU,表明srPoIFN-α具有良好抗PEDV活性。这些结果为进一步开发可溶性IFNα药物制剂提供参考。
朱睿张弘石吴植谢军张蕾覃光让房崇琴成大荣朱善元
关键词:原核表达抗病毒活性PEDV
一种促溶标签及其在蛋白质可溶性表达中的应用
本发明公开了一种促溶标签及其在蛋白质可溶性表达中的应用,具体地,该促溶标签的氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO.1所示,其编码基因的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.2所示。将该促溶标签编码基因和TEV蛋白酶识...
王玉崔论文帆
一种可溶性表达系统及其在蛋白可溶性表达中的应用
本发明公开了一种可溶性表达系统及其在蛋白可溶性表达中的应用。本发明人筛选不同来源的蛋白质二硫键异构酶,并将其与巯基氧化酶构建到同一个启动子控制下。通过添加氮末端标签策略优化这两种蛋白的表达,构建可溶性表达系统。在大肠杆菌...
文良柱方宏清韦炎龙窦俊
一种提高丙酮酸脱羧酶SsPDC在大肠杆菌中可溶性表达的方法
本发明属于生物工程技术领域,具体涉及一种提高丙酮酸脱羧酶SsPDC在大肠杆菌中可溶性表达的方法。本发明是以聚集抗性蛋白SlyD为融合标签,通过引入SlyD融合标签来提高SsPDC蛋白的可溶性表达量,具体是在SsPDC序列...
魏浩张同马志鑫周梓萱刘悦欣张豪杰高秀珍马钦元

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刘玉焕
作品数:64被引量:327H指数:13
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研究主题:大肠杆菌表达 可溶性表达 有机磷农药 降解 生物降解
郑裕国
作品数:1,460被引量:1,039H指数:16
供职机构:浙江工业大学
研究主题:突变体 工程菌 基因工程菌 腈水解酶 编码基因
王飞
作品数:252被引量:286H指数:9
供职机构:南京林业大学
研究主题:铁蛋白 原花色素 脂肪酶 生物柴油 酶活
俞炜源
作品数:153被引量:419H指数:11
供职机构:军事医学科学院生物工程研究所
研究主题:单链抗体 大肠杆菌 人源化 CHO细胞 尿激酶原
张改平
作品数:906被引量:2,140H指数:19
供职机构:河南农业大学
研究主题:单克隆抗体 试纸条 人工抗原 非洲猪瘟病毒 胶体金标记