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搜索到828篇“ 反向遗传系统“的相关文章

G57基因型H9N2亚型禽流感病毒反向遗传系统的建立与验证: 2025年; 旨在构建当前流行毒株H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus, AIV)的反向遗传操作平台。毒株A/Chicken/Guangdong/M/2021(H9N2)(简称为M)分离自广东某养鸡场病料。鉴定并分析其全基因组序列,通过RT-PCR以及无缝克隆技术完成质粒构建,共转染293T细胞成功拯救毒株命名为rM。测定病毒的稳定性和生长曲线;进行动物试验,从传播效率、致病性角度验证克隆毒株与原毒的一致性。结果显示:M毒株为G57基因型,为近年的流行毒株。M毒株与rM毒株在酸稳定性、热稳定性、致病性以及传播性等方面保持一致的生物学特性。综上,成功建立了G57基因型H9N2亚型AIV的反向遗传系统,且从体内和体外试验两个方面全面验证M与rM的生物学特性保持一致。; 史玉婷韩心雨钟沐卉林耀忠柳腾飞李焰尹会方贾伟新; 关键词：H9N2 禽流感病毒

表达增强型绿色荧光蛋白的C型禽偏肺病毒反向遗传系统的构建及优化被引量：1: 2024年; 【目的】禽偏肺病毒(Avian metapneumovrus,aMPV)是副黏病毒科偏肺病毒属成员,其所造成的鸡肿头症和产蛋率下降对养殖业造成严重危害。为更好地预防aMPV并研究其发病机制,本研究将增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)插入C型aMPV(aMPV/C)基因组中,构建表达EGFP的重组aMPV,并使用不同的载体及启动子构建aMPV迷你基因组,来优化aMPV反向遗传操作系统(reverse genetic system,RGS)的构建。【方法】将EGFP插入pBluescript-aMPV RGS的P和M蛋白之间非编码区并进行拯救,观察绿色荧光蛋白的表达情况,同时测定重组病毒滴度及遗传稳定性。为优化RGS的构建,采用含有T7启动子的pBluescript SK(+)和含有T7、CMV启动子的pcDNA3.1两种载体构建aMPV迷你基因组。首先将aMPV/C基因组两端的先导区(leader)和尾随区(trailer)与EGFP的cDNA进行PCR扩增,并切胶回收;其次将各胶回收片段按照leader-EGFP-trailer的顺序进行无缝克隆连接,并测序验证;最后将连接完整的迷你基因组反向插入两个载体中,构建aMPV/C的迷你基因组(pBR-aMPV/C和pc-aMPV/C)。在拯救迷你基因组的试验中,将两个aMPV/C迷你基因组与3个表达N、P和L蛋白的质粒共转染到BHK-21细胞中,观察绿色荧光蛋白的表达情况。【结果】拯救的aMPV-EGFP重组病毒测序结果显示,EGFP已成功插入aMPV基因组中,并在前3代aMPV-EGFP重组病毒中稳定表达。aMPV-EGFP重组病毒滴度在感染96 h后达到105.5 TCID 50/mL。而pBR-aMPV/C和pc-aMPV/C两个重组质粒的测序结果也证明了含有EGFP的aMPV迷你基因组构建完成。将3个重组质粒分别与辅助质粒共转染至BHK-21细胞中,转染24 h后观察到细胞中绿色荧光蛋白表达,证明aMPV-EGFP重组病毒及pBR-aMPV/C和pc-aMPV/C两个aMPV迷你基因均都成功表达了EGFP。【结论】本研究成功构建了两个aMPV迷你基因组并拯救了aMPV-EGFP重组病毒,重组病毒具有良好的遗传稳定性。�; 郭禹程晶左玉柱范京惠姜海军; 关键词：反向遗传系统 T7启动子

猪轮状病毒江西分离株AY01反向遗传系统建立及嵌合抗原重组轮状病毒交叉中和研究: 猪轮状病毒（Porcine rotavirus,PoRV）是导致仔猪病毒性腹泻的主要病原之一,PoRV感染引起仔猪腹泻、呕吐、脱水甚至死亡。近年来国内仔猪轮状病毒腹泻明显增多,给养猪业带来了严重的经济损失。轮状病毒基因组...; 刘昌锦; 关键词：猪轮状病毒全基因组测序反向遗传系统

猫杯状病毒反向遗传系统的建立及弱毒株的构建被引量：1: 2024年; 为了构建猫杯状病毒(FCV)弱毒疫苗候选株,从杭州流行的FCV毒株FCV-HZ-DF-19中提取基因组RNA,利用RT-PCR技术分3段扩增获得FCV全基因组,通过同源重组的方法将全长基因组克隆至已插入榔头状核酶(HamRz)和丁型肝炎核酶(HdvRz)的PCI载体,获得中间质粒pPCI-FCV;以pPCI-FCV为模板扩增获得含HamRz、HdvRz和FCV全基因组的产物FCV-H,并将其连接到BAC载体中获得含有FCV全基因组的克隆pBAC-FCV。将pBAC-FCV转染猫肾细胞F81连续传代后收获病毒。针对FCV毒力相关的LC基因进行缺失,获得感染性克隆pBAC-FCV-ΔLC,通过转染表达FCV-VP1蛋白的猫肾细胞系进行病毒拯救。结果显示,拯救毒株rBAC-FCV和LC基因缺失毒株rBAC-FCV-ΔLC均可产生细胞病变;测序结果表明,拯救毒株的基因序列与亲本毒株FCV-HZ-DF-19一致,且生长曲线与亲本毒相似,而基因缺失毒株的生长则慢于亲本毒株,产生的噬斑大小也明显小于亲本毒株,表明缺失LC基因后病毒毒力下降。结论:本研究成功构建了FCV的反向遗传系统及基因缺失弱毒株,为后续弱毒疫苗研发和FCV生物学特性研究奠定了基础。; 于雯孙慧敏方晨捷宋家升鲍恩东; 关键词：同源重组基因缺失

稳定表达T7聚合酶细胞系、轮状病毒反向遗传系统及其构建方法和应用: 本发明公开了稳定表达T7聚合酶细胞系、轮状病毒反向遗传系统及其构建方法和应用。本发明从新生犊牛腹泻粪便中分离获得两株牛轮状病毒分离株并进一步构建稳定表达T7RNA聚合酶的细胞系，其微生物保藏编号是：CGMCC No.45...; 常继涛尹鑫姜志刚齐瑛琳王芳孙超

猫冠状病毒反向遗传系统的建立: 猫冠状病毒（Feline coronavirus;FCoV）有两种致病类型：猫传染性腹膜炎病毒（FIPV）和猫肠道冠状病毒（Feline enteric coronavirus;FECV），有研究表明FIPV是由FECV...; 曹洪敏; 关键词：反向遗传学

重组麻疹病毒沪191株反向遗传系统的建立被引量：1: 2023年; 目的构建麻疹减毒病毒(Measles virus,MV)沪191(MV-S191)株感染性cDNA,以绿色荧光蛋白(eGFP)为靶标,选择外源基因插入区域,建立反向遗传系统重组病毒载体疫苗技术平台。方法提取MV-S191基因组RNA,逆转录获得cDNA,以PCR法分8段扩增麻疹病毒全长基因组cDNA,通过Gibson法连接各片段构建全长基因组cDNA,并将其克隆至pBR322质粒,获得pMV-S191。在pMV-S191的P、M或H、L基因间区域插入eGFP,获得pMV2-eGFP、pMV3-eGFP。同时构建pcDNA-N、P、L3个辅助质粒分别表达麻疹病毒核蛋白(N)、磷酸化蛋白(P)和依赖RNA的RNA聚合酶(L)。将pMV-S191、pMV2-EGFP和pMV3-EGFP分别与辅助质粒通过脂质体lipofectamine 2000共转染BSR-T7/5细胞,5d后取上清及细胞裂解液感染Vero细胞,收获重组病毒。结果通过反向遗传系统成功获得麻疹病毒疫苗株拯救株rMV-S191,感染Vero细胞后,在显微镜下观察到有合胞体形成。通过无缝克隆的方式,将eGFP基因克隆至pMV-S191中,成功获得pMV2-eGFP、pMV3-eGFP,按照相同的方法共转染获得rMV2-eGFP和rMV3-eGFP,将其分别感染Vero细胞,在显微镜下均可观察到形成的麻疹病毒合胞体,且在荧光显微镜下可观察到表达的绿色荧光蛋白。结论成功建立MV-S191的反向遗传系统并确定外源基因的插入位点,为以麻疹病毒为载体新型疫苗的研发奠定了基础。; 杨志辉裴捷郭靖申硕; 关键词：反向遗传学

蜱传脑炎病毒反向遗传系统的构建及应用: 蜱传脑炎(Tick-borne encephalitis,TBE)是由蜱传脑炎病毒(Tick-borne encephalitis virus,TBEV)感染引起的中枢神经系统疾病,严重时可致患者死亡或残留终生神经系统后...; 赵家玄; 关键词：蜱传脑炎病毒反向遗传系统嵌合病毒

一种构建番鸭呼肠孤病毒反向遗传系统的方法: 本发明公开了一种构建番鸭呼肠孤病毒反向遗传系统的方法，通过从含有番鸭呼肠孤病毒细胞培养毒提取病毒基因组RNA，通过设计的特定引物，以病毒基因组RNA为模板RT‑PCR扩增MDRV全序列的基因分段，将目的基因分段进行酶切连...; 林锋强陈少莺王劭

传染性支气管炎病毒反向遗传系统的构建策略与应用被引量：2: 2023年; 传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus, IBV)是一种具有高度传染性的禽冠状病毒,主要感染鸡的呼吸系统、肾脏和生殖系统等,是导致家禽产业经济损失的主要原因之一。IBV血清型和基因型众多,不同毒株之间交叉保护性差,疾病防控困难。IBV反向遗传系统的建立与应用为病毒分子水平研究、致病机制研究和新型疫苗研发等提供了新的途径。本文主要介绍了IBV反向遗传技术的构建策略,包括细菌人工染色体(载体)系统、体外连接系统、痘病毒载体系统和基于靶向RNA重组技术等,以及IBV反向遗传系统在病毒基因组结构和功能研究、新型疫苗研发和病毒表达载体研究等方面的应用,以期能为IBV的研究提供参考。; 赵秀美张华贾惠孙智远徐孝宙余智清姜逸; 关键词：传染性支气管炎病毒反向遗传系统 S基因疫苗

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