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搜索到638篇“ 反向遗传学“的相关文章

利用反向遗传学技术拯救重组H1N1 pdm09亚型流感病毒: 2025年; 目的:利用反向遗传学技术拯救重组H1N1 pdm09病毒,评价其在MDCK细胞和鸡胚内的生长特性以及对BALB/c小鼠的致病性。方法:RT-PCR技术扩增A/Puerto Rico/8/1934(简称PR8)病毒基因片段,并克隆至pHW2000双向表达载体上。全球共享流感数据倡议组织(global initiative of sharing all influenza data,GISAID)数据库中下载A/Wisconsin/588/2019(H1N1)的血凝素(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(neuraminidase,NA)序列,将其HA非编码区替换为A/California/07/2009(H1N1)的HA非编码区。全基因合成A/Wisconsin/588/2019的HA和NA片段,分别克隆至pHW2000双向表达载体上。将PR8病毒6个内部基因重组质粒与A/Wisconsin/588/2019的HA和NA重组质粒共转染293T细胞与MDCK细胞,拯救重组病毒。对重组病毒进行血凝效价测定和RT-PCR鉴定以判断是否拯救成功。将重组病毒接种MDCK细胞和9~10日龄鸡胚,评价其生长特性并绘制生长曲线。将重组病毒以滴鼻方式感染BALB/c小鼠,记录小鼠体重变化和生存率以评价其致病性。结果:成功拯救出重组A/Wisconsin/588/2019病毒,血凝效价为1∶8,测序鉴定其HA和NA序列与预期一致,重组病毒接种MDCK细胞后72 h,大部分细胞完全脱落,病毒滴度为10^(5.38)TCID_(50)/mL,复制高峰期为接种后60 h,接种鸡胚后的血凝效价最高可达1∶2^(8)。重组病毒(病毒稀释比为1∶1)滴鼻BALB/c小鼠后第8天,小鼠全部死亡,对小鼠的半数致死剂量为10^(-1.38)/50μL。结论:成功拯救一株重组H1N1pdm09病毒,该病毒在MDCK细胞上生长良好且具有良好的鸡胚适应性,对小鼠具有致病性和致死性,为反向遗传学技术快速拯救流感病毒提供新思路。; 黎燕周克茹季旻珺王桂芹; 关键词：季节性流感 H1N1

冠状病毒的反向遗传学研究进展被引量：1: 2024年; 冠状病毒是一种能够感染多种动物和人快速进化的病原体,可引起轻度至重度呼吸道感染,在全球范围内广泛流行,尤其是2019年爆发了前所未有的SARS-CoV-2疫情,给社会造成了严重的公共卫生危机和重大的经济损失,迫切需要人们加深对冠状病毒生物学的了解。反向遗传学是研究病毒基因组结构和功能的强大平台,已经广泛应用于病毒的复制和致病机理研究、蛋白功能表征、减毒疫苗研发和抗病毒治疗药物的筛选等方面。本文概述了冠状病毒和冠状病毒反向遗传系统的进展并进行展望,期望为进一步开展冠状病毒致病与防治等基础研究及冠状病毒载体构建、新型疫苗研制等应用研究提供新见解。; 刘强牛小霞陈吉祥加华才让高辉方敏刘艳玲张思浓李勇; 关键词：冠状病毒反向遗传学感染性克隆病毒拯救

基于全质粒的SA11轮状病毒反向遗传学系统构建: 2024年; 目的建立基于全质粒的轮状病毒反向遗传学系统,为轮状病毒致病机制研究、疫苗研发提供更为快速有效的手段。方法基于11和14质粒系统进行毒株rSA11和携带外源荧光标记基因的rSA11-NSP3-UnaG毒株拯救,通过酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent serologic assay,ELISA)、荧光显微镜、RNA聚丙烯酰胺凝胶电泳(poly-acrylamide gel electrophoresis,PAGE)、蚀斑和半数细胞培养感染剂量(50%cell culture infectious dose,CCID_(50))结合ELISA(CCID_(50)combined ELISA,CCIDEA_(50))方法对拯救毒株进行鉴定、传代稳定性及增殖动力学研究。结果拯救病毒ELISA结果均为阳性。荧光显微镜观察发现,rSA11无绿色荧光,rSA11-NSP3-UnaG可见大量绿色荧光富集。PAGE结果显示,rSA11电泳带型与野生型SA11(wtSA11)电泳带型一致。相比于wtSA11和rSA11,rSA11-NSP3-UnaG毒株NSP3基因片段发生迁移,片段大小与预期一致。此外,rSA11和rSA11-NSP3-UnaG在MA104和Vero细胞中连续传代,其电泳带型均保持一致。蚀斑结果显示,相比于rSA11,rSA11-NSP3-UnaG蚀斑形态略小。CCIDEA_(50)检测结果显示,P1~P10代rSA11和rSA11-NSP3-UnaG在MA104和Vero细胞中的病毒滴度均≥6.5 lgCCIDEA_(50)/mL,最高可达8.5 lgCCIDEA_(50)/mL。病毒增殖动力学分析显示,不同MOI的rSA11在MA104细胞中的增殖趋势与wtSA11基本趋于一致,但在Vero细胞中其增殖趋势较wtSA11迟缓,且MOI=0.01与MOI=0.1的rSA11在Vero细胞中的增殖趋势一致。结论11和14质粒系统均可以成功拯救rSA11和rSA11-NSP3-UnaG,拯救毒株在MA104和Vero细胞中可以有效增殖,传代稳定性良好。; 王云瑾程亚慧陈汉泉寇桂英侯风萍包红胡广宏李晓萌李雄雄; 关键词：轮状病毒反向遗传学基因重配

一株轮状病毒疫苗（RV5）衍生株特征及LLR株反向遗传学研究: 目的:了解我国病毒性腹泻监测中发现的一株疫苗衍生株的生物学特点和建立我国兰州人用羊源轮状病毒(Lanzhou lamb rotavirus,LLR)疫苗株的反向遗传学技术平台,基于上述平台拯救表达诺如病毒结构蛋白(Vir...; 何莲花; 关键词：轮状病毒反向遗传学诺如病毒联合疫苗

基于酵母转化偶联重组(TAR)技术的PDCoV反向遗传学操作系统的构建与应用: 猪δ冠状病毒（Porcine deltacoronavirus,PDCoV）是一种新型的猪肠道冠状病毒,可引起新生仔猪急性腹泻、呕吐和死亡。2014年,PDCoV在美国猪群中首次爆发,随后迅速传播至全球多个国家,给世界养...; 张钰灿; 关键词：反向遗传学

C基因沉默的小反刍兽疫病毒Nigeria 75/1株反向遗传学系统的建立: 2024年; 为建立小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)反向遗传学体系,本研究以PPRV Nigeria75/1疫苗株基因组序列为基础,PCR分7个片段扩增病毒基因组,运用重叠延伸PCR(Gene splicing by overlap extension PCR,SOE-PCR)在3’端引入锤头状核酶(Hammerhead ribozyme,HamRz)、5’端引入丁型肝炎病毒核酶(Hepatitis D virus ribozyme,HdvRz)和T7终止子,构建PPRV全长cDNA感染性克隆质粒pBluescript SK-PPRV,进一步构建C基因沉默的病毒全长cDNA感染性克隆染质粒pBluescript SK-PPRVΔC。pBluescript SK-PPRVΔC、pcDNA3.1-N、pcDNA3.1-P和pcDNA3.1-L共转染BSR T7/5细胞,48 hpt后收集细胞反复冻融上清液感染山羊子宫内膜上皮细胞(GEECs),盲传3代,拯救重组病毒命名为rPPRVΔC。重组病毒感染GEECs细胞中RT-PCR扩增出病毒N、P和部分L基因(L2)片段,Western blot检测到N蛋白表达、C蛋白未表达,IFA也检测到N蛋白表达,成功建立了PPRV Nigeria75/1株反向遗传学体系。研究结果为PPRV新型标记疫苗的研制及C蛋白致病机理研究奠定了基础。; 李菊石晓玲杨晓莉杨东亮毕冬琳刘方程张潇文李琼毅李琼毅; 关键词：C基因 SOE-PCR 病毒拯救反向遗传学

基于反向遗传学技术探讨TMUV 3′UTR对YFV17D在DEF细胞中增殖的影响: 黄热病（Yellow Fever,YF）是由黄热病毒（Yellow Fever Virus,YFV）引起的急性传染病。其减毒疫苗株YFV17D由野生型Asibi毒株通过在恒河猴、小鼠和鸡胚中连续176次传代致弱获得,该毒...; 何宇航; 关键词：反向遗传学茎环结构

一种优化型反向遗传学系统及其在拯救裂谷热病毒中的应用: 本发明公开了一种优化型反向遗传学系统及其在拯救裂谷热病毒中的应用，该反向遗传学系统能高效拯救裂谷热病毒，弥补了传统反向遗传学系统拯救效率低的缺陷，且不影响病毒的正常增殖复制，基于该系统拯救获得的毒株与传统系统拯救出的毒株...; 彭珂李淑芬张玉兰张崇涛

具有遗传密码扩展功能的Vero细胞系的构建及CVA10病毒的反向遗传学拯救: 张瑶

反向遗传学技术在动物RNA病毒研究中的应用进展: 2024年; 反向遗传学操作系统的出现为RNA病毒在体外研究提供了一种重要的技术方法,使在精确位置对病毒基因组进行修饰成为可能。病毒的反向遗传系统通常构建在高拷贝数或低拷贝数的质粒中,通过对基因进行改造或插入外源基因等操作实现对病毒改造的目的,被广泛应用于RNA病毒研究的各个领域,从毒力基因到抗病毒筛选和疫苗开发,为研究病毒蛋白的结构与功能、解析其感染致病机制、新型疫苗构建等提供技术平台。本文就反向遗传操作系统的构建方法、面临的问题和解决思路及在动物RNA病毒中的实际应用进行了综述,为新发和再发动物疫病筛选新型药物靶点、新的基因功能挖掘提供技术支撑。; 关飞虎宋亚芬温立佳王丽华李丹张辉张乾义王静; 关键词：RNA病毒病毒拯救感染性克隆

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