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抗体夹心酶联免疫吸附试验在肺炎支原体抗原检测中的建立与应用
2025年
目的构建用于检测肺炎支原体抗原的抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)法,并应用其检测不同耐药表型临床分离株抗原。方法鉴定抗肺炎支原体单克隆抗体4G4、8H6的抗体结合位点竞争性及结合活性;以4G4为包被抗体,8H6为抗体建立抗体夹心ELISA法,优化其线性范围、稳定性、特异性、广泛适用性与准确度。结果单克隆抗体4G4、8H6具有不同的抗原结合位点,半数最大效应浓度(EC50)分别为0.4113、0.1881μg/ml;最佳反应体系为包被抗体浓度4μg/ml,抗体1∶4000稀释,封闭液为含2%BSA、2%蔗糖的0.01 mol/L PBS。该方法线性范围为1~32 U,线性回归方程Y=0.0742X+0.073,R2=0.9969;批间变异系数为0.4784%~7.9613%,批内变异系数为1.6158%~13.1754%;特异性与广泛适用性佳,不与新型冠状病毒感染、流感、猴痘病毒及多种细菌交叉反应,可检测不同耐药株抗原;与肺炎支原体抗原检测商用试剂盒(ELISA法与胶体金法)检测结果符合率96.7%~103.3%。结论该抗体夹心ELISA法线性范围优、稳定性强、特异性好、适用广、准确度高,可用于肺炎支原体疫苗生产中的抗原定量。
张凤莲钏鸿云童菲袁广波李诚伟廖国阳
关键词:肺炎支原体抗原检测单克隆抗体
猪链球菌溶血素抗体夹心酶联免疫吸附试验方法的建立
2024年
目的建立猪链球菌溶血素(SLY)的抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,通过对SLY进行定量检测来评价猪链球菌产生SLY的能力与致病力。方法用4种胆固醇依赖性溶细胞毒素的类毒素免疫BALB/c鼠、新西兰大白兔制备高免血清,以间接ELISA方法检测高免血清与重组猪溶素(rSLY)、重组肺溶血素(rPLY)、重组李斯特菌溶血素O(rLLO)和重组产气荚膜梭菌溶血素O(rPFO)的反应性。以全人单克隆抗体1-10F(专利号CN 113957057B)为捕获抗体、高免血清为检测抗体,经正交试验优化两类抗体的工作浓度,建立抗体夹心ELISA方法,并对猪链球菌、肺炎球菌、单增李斯特菌、产气荚膜梭菌、溶血性大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌的培养液进行特异性试验。结果间接ELISA方法显示,兔抗rSLY^(P353L)血清与rPLY有交叉反应,鼠抗rPLY血清与rSLY、rLLO有交叉反应,四血清与rPLY、rSLY、rLLO有较强反应,rPFO与3种血清的反应性较弱。经优化,抗体夹心ELISA方法的捕获抗体包被量为100 ng,检测抗体为鼠抗rPLY血清(1∶1000),在此条件下,检测25~800ng/mL的rSLY呈线性关系,R^(2)=0.986;对猪链球菌培养液为强阳性反应,对肺炎球菌培养液为弱阳性反应,其他为阴性反应。结论本研究建立的抗体夹心ELISA方法能定量检测SLY,将为诊断高致病性猪链球菌感染提供新手段。
陈志萍陈益吴梦邓晓雨高雅晴葛良鹏杜华茂
关键词:猪链球菌肺炎球菌双抗体夹心酶联免疫吸附法
犬科动物感染细粒棘球绦虫粪抗原的抗体夹心酶联免疫吸附试验检测技术
本标准规定了细粒棘球绦虫粪抗原的抗体夹心酶联免疫吸附试验(Sandwich ELISA)检测技术要求。 本标准适用于细粒棘球绦虫感染终末宿主(犬科动物)的诊断、检疫、效果考核及其相关流行病学调查。
抗体夹心酶联免疫吸附试验检测血清HMGB-1水平在胃癌患者中的临床意义
2015年
目的应用抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELl SA法),分析胃癌患者血清HMGB-1(高迁移率族蛋白B-1)水平的临床意义。方法使用ELISA法对98例胃癌患者血清HMGB-1水平进行检测,用电化学发光法对血清癌胚抗原(CEA)含量进行测定,并和40例胃良性病变者及40例正常者进行比较。结果胃癌组患者血清中HMGB-1与CEA水平均明显高于正常对照组与胃良性病变组(P<0.01)。和传统肿瘤标志物CEA对比,血清中HMGB-1检测在胃癌早期患者中有良好敏感性(70.6%)与准确性(74.0%),并具有统计学意义(P<0.05)。结论 HMGB-1和胃癌的发生发展密切相关,检测血清中HMGB-1的含量可以提高早期胃癌的诊断水平。
郭强李井野况立革
关键词:高迁移率族蛋白B-1酶联免疫吸附试验胃癌
抗体夹心酶联免疫吸附试验法在肺结核患者血清HMGB1水平检测中的应用被引量:5
2014年
目的应用抗体夹心免疫吸附法(ELISA)检测肺结核患者抗结核治疗前后血高迁移率族蛋白1(HMGB1)水平变化研究,以探讨其临床诊断意义。方法采用ELISA法检测患者血清HMGB1的水平,同时测定活动组患者在抗结核治疗前、治疗后1个月、治疗后3个月及30例好转组的血清HMGB1水平。结果活动组患者比对照组、稳定组的血清HMGB1浓度水平升高,差异具有统计学意义(P<0.05),稳定组患者比对照组的血清HMGB1浓度水平升高,但差异无统计学意义(P>0.05);治疗后1个月、治疗后3个月的血清HMGB1浓度水平比治疗前均有所降低,差异无统计学意义(P>0.05),但其中治疗3个月后有30例活动性肺结核患者病情好转(好转组)比治疗前显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论动态监测肺结核患者血清HMGB1水平,对活动性肺结核的辅助诊断及疗效观察有重要意义。
谭斌肖红云
关键词:肺结核活动性高迁移率族蛋白1
抗嗜肺军团菌血清8型单克隆抗体的制备及抗体夹心酶联免疫吸附试验检测法的建立
2009年
目的:制备针对嗜肺军团菌血清8型的单克隆抗体,并建立抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法。方法:用甲醛灭活的嗜肺军团菌血清8型菌免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗嗜肺军团菌血清8型单克隆抗体,建立夹心ELISA检测方法。结果:研制出8株能特异性分泌抗嗜肺军团菌血清8型单克隆抗体的杂交瘤细胞株,Ig类型分别为IgM(2株)、IgG3(1株)和IgG1(5株);利用IgG1型单抗6G10与6C7配对,建立了夹心ELISA检测方法,该方法的最低检出浓度为2.6×105cfu/mL,除与金黄色葡萄球菌有微弱的交叉反应外,与14株其他血清型嗜肺军团菌、17株非嗜肺军团菌及11株非军团菌均无交叉反应,具有较高的特异性。结论:制备了具有高特异性和亲和力的抗嗜肺军团菌血清8型单克隆抗体,并建立了夹心ELISA检测方法。
郭景玉朱紫雯王津杨瑞馥宋亚军
关键词:单克隆抗体
犬粪便棘球绦虫抗原的抗体夹心酶联免疫吸附试验检测法建立与应用被引量:22
2008年
目的研究抗体夹心免疫吸附检测犬粪便棘球绦虫虫体抗原的方法并评价其在实际工作中的应用价值。方法实验犬12只,分实验组和对照组,实验组用活化绵羊源原头蚴(G1型)作人工感染;感染后0~8周内收集粪便,56d宰杀实验犬,收集成虫;制备成虫抗原和虫体代谢/分泌抗原,蛋白K处理抗原并分别免疫成年绵羊和新西兰白兔;绵羊抗血清用80%饱和硫酸铵沉淀、透析,兔抗血清过IgG亲和层析柱,分别获得纯化抗体;观察犬粪便在PBS液中-80℃冷冻3d或在含1%Formalin的PBS液中70℃~80℃加热8h的处理方法对检出结果的影响。运用该方法对四川省甘孜县达通玛区4个乡的580只家犬吡喹酮每6月一次驱虫前后的粪抗原进行监测。结果试验系统的敏感性为92.3%,特异性为80%;粪抗原从感染后的第2~3周可检出;两种样品处理方法都可以灭活虫卵但不影响检出效果;检测方法可同时用于对细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫感染的诊断;达通玛区家犬粪抗原阳性率从2000年的50%下降到2005年的17%。结论检测方法具有较高的特异性和敏感性;推荐粪便用加热的方法处理可以灭活虫卵以防止生物污染;该方法可以在基层推广应用。
黄燕Heath D DavidAntone J Christine邱加闽王谦
关键词:棘球属双抗体夹心酶联免疫吸附试验
抗体夹心酶联免疫吸附试验检测粉尘螨2组变应原方法的建立被引量:1
2006年
尘螨是最常见、最主要的过敏性疾病变应原。螨体中最主要的致敏成分是1组和2组变应原(Der1、Der2)。免疫吸附测定(ELISA)是检测尘螨变应原含量应用最广泛的方法.但国内定量检测尘螨变应原的方法学研究鲜见报道。本研究用重组粉尘螨2组Der f 2(rDer f 2).制备免疫血清,建立一种以辣根过氧化物系统为基础的抗体夹心ELISA,以快速检测Der f2.现报告如下。
练玉银刘志刚吉坤美王广伟刘晓宇
关键词:双抗体夹心酶联免疫吸附试验螨变应原粉尘螨双抗体夹心ELISA原方
抗体夹心酶联免疫吸附试验检测布氏菌抗原的实验研究被引量:2
2004年
目的 建立检测布氏菌抗原特异、敏感和快速的试验方法。方法 在制备高滴度布氏菌抗体辣根过氧化物结合物及其冻干制品基础上 ,建立检测布氏菌抗原的抗体夹心酶联免疫吸附试验 (DAbS -ELISA) ,包括常规DAbS -ELISA及快速DAbS -ELISA。用建立的两种DAbS -ELISA法对布氏菌菌体抗原及可溶性抗原进行有关其特异性及敏感性对比观察 ;同时对模拟的这些抗原污染的饮用水标本进行对比观察。结果 常规DAbS -ELISA检测布氏菌 5 44A、16M、13 3OS及 10 4M的菌体抗原以及布氏菌 16M可溶性抗原的敏感性分别为 0 .2 2万菌 /ml、12 0万菌 /ml、190万菌 /ml、2万菌 /ml和 0 .0 12 μg/ml ;用快速DAbS -ELISA法的敏感性分别为 2 2万菌 /ml、12 0万菌 /ml、190 0万菌 /ml、2 0万菌 /ml和 1.2 μg/ml;同时用这两种DAbS -ELISA检测上述抗原污染的饮用水标本其敏感性分别为 0 .2 2万菌 /ml、190 0万菌 /ml、2 0万菌 /ml和 0 .0 12 μg/ml ;以及 2 2万菌 /ml、12 0万菌 /ml、190 0万菌 /ml、2 0 0万菌 /ml和 1.2 μg/ml。而且这两种DAbS -ELISA法检测不含布氏菌抗原的所有对照均为阴性反应。结论 抗体夹心酶联免疫吸附试验是检测布氏菌抗原的特异、敏感、快速和适用的试验方法。
赵鸿雁鲁齐发
关键词:布氏菌可溶性抗原双抗体夹心酶联免疫吸附试验高滴度
单克隆抗体JPG3抗体夹心酶联免疫吸附试验用于血吸虫病疗效考核的探讨被引量:3
2004年
尹东陈红根许雪萍衣方誉姜唯声曾小军王腊梅
关键词:单克隆抗体血吸虫病疗效观察

相关作者

于澜
作品数:52被引量:78H指数:5
供职机构:第四军医大学
研究主题:汉滩病毒 汉坦病毒 重组腺病毒 嵌合基因 免疫学
王延江
作品数:320被引量:838H指数:15
供职机构:第三军医大学大坪医院
研究主题:阿尔茨海默病 AΒ AD 依达拉奉 APP
崔建和
作品数:41被引量:146H指数:7
供职机构:南京医科大学附属淮安第一医院
研究主题:非酒精性脂肪性肝病 脂联素 胰岛素抵抗 骨密度 非酒精性
鱼海琼
作品数:45被引量:132H指数:7
供职机构:广东出入境检验检疫局
研究主题:赤羽病病毒 引物 副结核病 试剂盒 赤羽病
康懿
作品数:9被引量:46H指数:4
供职机构:上海交通大学附属第六人民医院
研究主题:型胶原 酶联免疫吸附法 糖尿病肾病 乙型肝炎疫苗 乙型肝炎表面抗原