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一种ADAMTSL5原核表达载体的构建及其表达纯化方法: 本发明涉及一种ADAMTSL5原核表达载体的构建及其表达纯化方法。该构建方法包括：1)利用PCR反应扩增编码ADAMTSL5的基因序列；2)以NdeI和HindIII为酶切位点，将PCR产物连接至质粒载体上，获得重组表达...; 袁育林覃如李尚阳

人MTHFD1L蛋白的原核表达载体、构建方法及应用: 本发明实施例公开了人MTHFD1L蛋白的原核表达载体、构建方法及应用；构建方法包括步骤：S1、以表达MTHFD1L蛋白的基因序列为模板，通过PCR扩增获得MTHFD1L基因片段；其中，PCR扩增的引物对为MTHFD1L‑...; 韩聪胥启霞

鼠伤寒沙门氏菌细菌铁蛋白(Bfr)的生物信息学分析及原核表达载体构建: 2024年; 为了获得高纯度的鼠伤寒沙门氏菌细菌铁蛋白(Bfr),试验利用生物信息学软件对Bfr的结构、翻译后修饰和抗原表位等进行预测分析;通过PCR扩增鼠伤寒沙门氏菌Bfr基因,将其与pET-32a(+)载体连接并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,通过SDS-PAGE分析和Western-blot检测表达及纯化后的目的蛋白。结果表明:Bfr由476个氨基酸组成,分子式为C_(1440)H_(2406)N_(476)O_(606)S_(85),相对分子质量为38808.87,理论等电点为5.25;无信号肽和跨膜区,二级结构包含α-螺旋(81.01%)、无规则卷曲(13.19%)、β-折叠(3.16%)和延伸链(1.90%);含有9个线性B淋巴细胞抗原表位和5个T淋巴细胞抗原表位,以及10个磷酸化位点和10个互作蛋白,Bfr和Bfrd蛋白表面匹配良好、结合稳定。试验成功克隆出Bfr基因,其大小约为476 bp,获得大小约为35 ku的高纯度重组蛋白Bfr。说明Bfr蛋白具有良好的反应原性,有可能成为鼠伤寒沙门氏菌的疫苗开发和疾病诊断的候选蛋白。; 张伟张伟于海涛霍明凯于海涛黄炜涵周霞王震周霞; 关键词：鼠伤寒沙门氏菌生物信息学原核表达 SDS-PAGE

色氨酸脱羧酶基因原核表达载体及其应用: 本发明公开了一种色氨酸脱羧酶基因原核表达载体，由如下方法构建而成：(1)以pEGX‑4T‑1为出发质粒，将pEGX‑4T‑1利用pflmⅠ和btgⅠ双酶切之后连入长度为100bp的人造链，构建得到质粒pEGX‑4T‑J；...; 岳明瑞曹华杰谢沛郭永胜腾义卫

CtRALF蛋白质、CtRALF基因、引物、原核表达载体及其应用: 本发明公开了CtRALF蛋白质的氨基酸序列、CtRALF基因的核苷酸序列、扩增CtRALF基因的引物、原核表达载体及其应用。本发明的CtRALF蛋白质能调控炭疽菌的定植能力；调控寄主植物的共生信号；调控寄主植物在低磷条件...; 廖红东李鑫张纯梁秀辉郑井元文湘钰吴永红邓雪蕾王俊莹杨怡

药用级人成纤维细胞生长因子-18的原核表达载体及其构建方法、制备方法和应用: 本发明公开了可规模化制备药用级人成纤维细胞生长因子‑18的原核表达载体，其包括编码含有人源成纤维细胞生长因子18的融合蛋白的核苷酸序列组成的DNA片段和编码小分子样泛素化修饰蛋白酶的核苷酸序列组成的DNA片段；本发明无需...; 李校堃林丽苏志坚丛维涛朱忠欣胡振宇

羊痘病毒81基因原核表达载体构建及蛋白表达: 2024年; 为研究羊痘病毒81基因的生物学功能,构建羊痘病毒81基因的原核表达载体并表达其蛋白。利用在线软件对羊痘病毒81基因进行生物信息学分析,通过PCR技术扩增羊痘病毒81基因,与原核表达载体PET-42b构建重组质粒,大肠感受态细胞表达其蛋白。结果表明:羊痘病毒81基因蛋白无信号肽,无跨膜区,有19个抗原决定簇,二、三级结构预测表明其以无规则卷曲为主,表现出疏水性;PCR成功扩增羊痘病毒81基因(492 bp),PET-42b-81原核表达载体构建成功,成功表达18.35 kDa大小81基因蛋白。本研究为深入探究羊痘病毒中间基因提供基础。; 葛志毅赵微程思危肖婼婷周娇洋李有文; 关键词：原核表达生物信息学分析

溶血素 E基因原核表达载体的构建与蛋白诱导表达: 2024年; 目的构建大肠杆菌(Escherichia Coli,E.coli)溶血素E(Hemolysin E)基因的重组质粒pCZN1-hlyE,诱导表达目的蛋白。方法通过NCBI数据库检索获取E.coli Hemolysin E基因序列(NC_000913.3),采用基于PAS(PCR-based Accurate Synthesis)的全基因合成法,设计全长拼接引物,合成目的基因,并成功构建重组质粒pCZN1-hlyE。将构建好的pCZN1-hlyE重组质粒转入大肠杆菌TOP10菌株中,并用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导Hemolysin E基因的表达,生成Hemolysin E毒力蛋白。结果经SDS-PAGE凝胶电泳,Western blot分析鉴定目的蛋白Hemolysin E分子量为28.72 kDa,与Hemolysin E基因核酸序列经DNAMAN软件分析所得蛋白分子量一致。结论被诱导表达的Hemolysin E蛋白存在于菌体裂解液上清中,并纯化制备重组蛋白。; 何学仙何晓艳潘晓玥; 关键词：原核表达

猪流行性腹泻病毒E基因原核表达载体的构建: 2024年; 目的:通过构建猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)E基因原核表达载体pET-E,为后续探讨E基因的原核表达以及功能研究奠定基础。方法:将PEDV E基因通过PCR方法进行扩增,PCR产物经凝胶电泳检测后,用试剂盒纯化回收目的片段,将胶回收产物与表达载体pET-32a连接后,转化入Trans BL21(DE3)感受态细胞中,挑取单菌落,摇菌培养过夜,提取质粒,用双酶切鉴定阳性载体。结果:成功扩增大小为231 bp的目的片段,构建了PEDV E基因原核表达载体。结论:本研究成功构建了PEDV E基因原核表达载体,为下一步进行E基因原核表达以及进一步研究PEDV E基因的功能奠定基础。; 陈燕玲; 关键词：猪流行性腹泻病毒 E基因原核表达

牛支原体重组融合膜蛋白基因M27-498原核表达载体的构建: 2024年; 为构建牛支原体融合膜蛋白原核表达载体,使用SOE-PCR技术融合M27、M498基因并扩增融合基因M27-498,利用基因克隆技术构建pMD19-T-M27-498双基因克隆载体,通过亚克隆技术将融合基因M27-498克隆至表达载体pColdⅠ,构建pColdⅠ-M27-498原核表达载体。结果:SOE-PCR产物的电泳条带约1167 bp,与融合基因M27-498片段相符;经PCR、双酶切、测序鉴定,重组质粒pMD19-T-M27-498、pColdⅠ-M27-498的DNA均包含融合基因M27-498。结论:pColdⅠ-M27-498原核表达载体构建成功,可为牛支原体亚单位疫苗的研发奠定基础。; 冉芳菲成虹松朱二鹏胡茜杨利利申艳娟赵依琳李广松胡鹏飞黄荣生何玲郝明祥程振涛; 关键词：牛支原体融合基因原核表达

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