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粉尘螨谷氧还蛋白-1样蛋白基因原核表达质粒的构建及结构分析: 2023年; 目的获得粉尘螨谷氧还蛋白-1样蛋白(Glutaredoxin-1,Grx1)的编码基因并构建表达质粒,对该基因及其编码蛋白质进行结构预测。方法以粉尘螨总RNA为模板,RT-PCR扩增获得编码基因后插入原核表达载体pET28a(+),构建的重组质粒转化入E.coil BL21(DE3)感受态细胞中,用异丙基-b-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-beta-Dthiogalactoside,IPTG)诱导表达,SDS-PAGE分析表达产物。采用生物信息学软件分析该基因及其编码蛋白的结构等生物学特征。结果获得的粉尘螨Grx1编码基因全长315bp,构建的原核表达质粒pET28a(+)-Grx1转化入大肠埃希菌感受态细胞后经IPTG诱导,表达相对分子质量为25.9×10^(3)的重组蛋白。生物信息学分析该基因编码的蛋白质由104个氨基酸组成,主要分布于细胞核(占87.0%)。该蛋白含有11个潜在磷酸化位点(4个苏氨酸,6个丝氨酸和1个酪氨酸),二级结构为α-螺旋(45.19%)、无规则卷曲(31.73%)、延伸链(14.42%)和β-转角(8.65%)。将该基因推导出的编码氨基酸序列进行Blast获得同源基因与屋尘螨谷胱甘肽样C8样蛋白(Dermatophagoides pteronyssinus glutaredoxin-C8-like)同源性最高(83.52%)。结论获得了粉尘螨Grx1的编码基因及其原核表达质粒,生物信息学分析该蛋白含有潜在的磷酸化位点且主要分布于细胞核,可为该基因的生理功能研究及粉尘螨的防制提供参考。; 任雅宁周鹰袁存银周冬梅廖媛芬强士豪罗金丹崔玉宝; 关键词：粉尘螨生物信息学基因克隆

刚地弓形虫SRS29C截短型基因的克隆及原核表达质粒的构建被引量：1: 2021年; 为构建刚地弓形虫SRS29C基因原核表达质粒,利用SignalP-5.0软件预测信号肽序列,去除SRS29C前端信号肽序列,设计引物并扩增SRS29C截短型基因序列,克隆并构建原核表达质粒。结果显示:SRS29C基因前51位氨基酸为信号肽区域,故将此段信号肽序列切除,获得长度为966bp的SRS29C截短型基因片段(SRS29Ccut),成功构建原核表达质粒p ET-28a-SRS29Ccut和p ET-32a-SRS29Ccut。此研究为今后对刚地弓形虫SRS29C蛋白的生物学功能及免疫特性进行更深入研究打下基础。; 袁娣邵怡张同瑶姜阜杉李秀荣宋淇淇; 关键词：刚地弓形虫原核表达质粒

非洲猪瘟多基因家族MGF-505-3R基因重组原核表达质粒的构建及表达被引量：2: 2021年; 目的构建非洲猪瘟多基因家族MGF-505-3R基因重组原核表达质粒,并进行表达。方法根据非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)MGF-505-3R基因CDS区序列设计特异性引物并进行PCR扩增,将目的基因片段与原核表达载体pET-32A(+)连接,构建重组原核表达质粒pET-32A(+)-MGF-505-3R。对蛋白进行生物信息学分析后,将重组原核表达质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞中,用1 mmol/L IPTG于37℃诱导表达6 h后,超声破碎菌体,获得的上清液经Ni-NTA亲和层析和CMSepharose FF阳离子交换层析纯化,BCA法测定蛋白产量。结果重组原核表达质粒经菌液PCR、双酶切及测序证明构建正确。MGF-505-3R蛋白为不稳定的疏水蛋白,为跨膜蛋白,蛋白二级结构由无规卷曲、α螺旋和β折叠组成为主要结构,三级结构预测结果与二级结构预测相符。表达的重组蛋白相对分子质量约为33000,BCA法测定重组蛋白产量可达19.8 mg/L。结论成功构建了MGF-505-3R基因重组原核表达质粒,表达并纯化了重组蛋白,为我国非洲猪瘟免疫血清学诊断试剂的制备及预防控制奠定了基础。; 武悦许会会徐一鸣王楠王泽宇杨莲花鲁中爽蔡维北吕忠蕾李霜; 关键词：非洲猪瘟原核表达

绵羊肺腺瘤病毒囊膜基因原核表达质粒构建及表达: 绵羊肺腺瘤病(Ovine Pulmonary Adenocarc-inoma,OPA)是由绵羊肺腺瘤病毒(jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV)引起的一种慢性、渐进式、传染性羊肿瘤疾病。这种普...; 徐先达; 关键词：绵羊肺腺瘤病绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白原核表达; 文献传递

人生长分化因子11基因原核表达质粒的构建、表达及其蛋白的纯化被引量：2: 2018年; 目的构建及表达人生长分化因子11(growth differentiation factor 11,GDF11)基因原核表达质粒,并对重组表达蛋白进行纯化。方法 PCR法扩增人源GDF11 cDNA全长序列,插入至载体pCold-I,构建重组质粒pCold-GDF11,转化感受态Rosetta(DE3)菌株,经终浓度为0.5 mmol/L的IPTG诱导表达后,超声破碎获得GDF11包涵体,添加8 mol/L尿素溶解,与Ni^(2+)NTA Agarose充分混匀后装柱,用含谷胱甘肽(glutathione,GSH)和氧化型谷胱甘肽(oxidized glutathione,GSSG)的复性液进行复性,经含咪唑的洗脱液洗脱获得目的蛋白,进行Western blot检测。结果重组质粒pCold-GDF11经双酶切及测序鉴定,构建正确;诱导表达蛋白的相对分子质量约45 000,主要以包涵体形式存在;GDF11蛋白纯化产物纯度达85%以上,每升菌液获得2.5 mg的目的蛋白,且可与小鼠抗His单克隆抗体发生特异性结合。结论成功构建了GDF11基因原核表达质粒,且表达产物经纯化后可获得纯度较高的目的蛋白。; 吴思思蒋维; 关键词：原核表达复性纯化

沙眼衣原体假定蛋白CT389原核表达质粒的构建及结构预测: 2017年; 目的构建能表达沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)假定蛋白CT389的质粒pGEX6P-ct389及预测其结构。方法设计特异性引物,以Ct基因组为模板,PCR法扩增ct389基因,构建携带目的基因的重组质粒pGEX6Pct389;通过PCR鉴定和双酶切鉴定初筛,测序鉴定验证结果;比较ct389和tc0668基因序列及其编码产物的相似性,采用生物信息学预测CT389蛋白的二级结构和三级结构。结果获得大小约为1 300 bp的ct389基因片段,并成功得到重组质粒pGEX6P-ct389。ct389和tc0668基因及其编码产物的相似性高达84%和92%,CT389蛋白α-螺旋、无规卷曲和β片层的含量分别为27.7%、49.26%和占23.04%。与其三级结构最接近的是鼠疫耶尔森氏菌的纤溶酶原激活物。结论Ct389与tc0668基因从DNA到编码产物具有较高的相似性,ct389可能是重要的沙眼衣原体毒力基因。; 唐翠连陈浩刘玖林周洲; 关键词：沙眼衣原体蛋白结构

构建原核表达质粒pGEX-4T-2-GFP并鉴定其在大肠杆菌中的表达: 2016年; 目的:构建绿色荧光蛋白(GFP)的原核表达质粒,用以研究小鼠巨噬细胞吞噬细菌的能力。方法:编码GFP的聚合酶链反应(PCR)产物经Eco RⅠ和Bam HⅠ双酶切后,与双酶切后的载体p GEX-4T-2相连,将p GEX-4T-2-GFP转化E.coli DH5α提取质粒,经测序后转化E.coli BL21中诱导GST-GFP融合蛋白表达,将表达融合蛋白的大肠杆菌滴入培养巨噬细胞的皿中,于荧光显微镜下观察GFP的表达及大肠杆菌被吞噬情况。结果:获得的重组质粒测序正确。荧光显微镜下能清晰观察到培养基中及被巨噬细胞吞噬后发绿色荧光的大肠杆菌。结论:成功构建了pGEX-4T-2-GFP重组质粒,为研究小鼠巨噬细胞吞噬细菌的能力创造条件。; 陆琤周晨辰张鹏飞张硌; 关键词：绿色荧光蛋白重组质粒荧光显微镜

抗犬瘟热病毒单域抗体库的构建与犬瘟热基因原核表达质粒的构建: 犬瘟热是由副黏病毒科麻疹病毒属的犬瘟热病毒引起的一种高度接触性的急性病毒病。临床上以双相热，红疹，结膜炎，白细胞减少及中枢神经系统损害为主要特征。近年来，犬瘟热疫苗的防治效果逐渐下降，而单克隆抗体以其较高的特异性被广泛应...; 阿米娜; 关键词：犬瘟热病毒核酸疫苗基因表达单域抗体

猪流行性腹泻病毒贵州株部分S基因原核表达质粒的构建: 2015年; 为给贵州猪流行性腹泻(PED)的诊断及防治提供科学依据,同时为猪流行性腹泻病毒(PEDV)部分S蛋白进一步表达建立相应检测方法奠定理论基础,利用贵州PEDV分离株,参考GenBank登录PEDV CV777株的S基因序列,选取主要抗原区域(COE)设计1对PEDV COE基因特异性引物,进行部分保护性抗原COE基因的PCR扩增,扩增产物与pMD19-T载体链接,鉴定正确后再亚克隆至pET32a位置,结果成功构建了贵州PEDV分离株COE基因的原核表达质粒,分离株COE基因与HBQX株的序列同源性达99.1%,与经典毒株CV777株的同源性为93.4%。; 何玉侠毛黎红周碧君王开功文明程振涛温贵兰冯旭芳潘廷云张艳刘长素; 关键词：猪流行性腹泻病毒原核表达质粒构建

鹿结核病流行株与卡介苗差异基因原核表达质粒的构建及表达: 2014年; 以吉林农业大学经济动物疾病实验室保存的鹿体内分离并鉴定的结核病流行株的基因组为模板,应用PCR方法从已构建的鹿结核病野毒株与卡介苗差异基因文库中扩增RD1区的Rv3872、Rv3873、Rv3874、Rv3875和Rv3878 5段目的基因,分别与p MD18-T Simple Vector连接,经PCR、酶切鉴定后的阳性重组克隆质粒与原核表达载体p GEX-4T-1连接并进行原核表达,采用谷胱甘肽琼脂糖亲和层析方法对目的蛋白进行纯化,通过SDS-PAGE和Western blot对表达产物的反应原性进行初步研究。基因测序结果显示差异基因与期望的序列一致,并在大肠杆菌中成功诱导表达,获得以可溶形式表达的目的蛋白,经SDS-PAGE分析目的蛋白的相对分子量与理论值相符,经Western blot鉴定纯化好的目的蛋白能与鹿结核病的阳性血清发生反应,具有良好的反应原性,为其在鹿结核病血清诊断学中的应用奠定了试验基础。; 王文玉曾范利时坤李健明刘红娜杜锐; 关键词：差异基因原核表达反应原性

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