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小豆利钠肽VaEG45的原核表达纯化和生物活性分析: 2025年; 为获得小豆利钠肽VaEG45纯化蛋白并明确其生物活性,利用pET-30a(+)构建VaEG45原核表达载体,大肠杆菌原核表达系统表达VaEG45蛋白,Ni-NTA层析柱纯化VaEG45蛋白,并用纯化蛋白处理小豆原生质体检测其活性。结果表明:构建的p ET-30a-His-VaEG45重组载体可使His-VaEG45蛋白在大肠杆菌中正确高效表达,表达蛋白分子量为11.6 kDa,纯化后蛋白浓度为0.49 mg·mL^(-1),纯度为90%;生物活性分析发现,His-VaEG45纯化蛋白可刺激小豆原生质体细胞膨大。研究成功表达并纯化了具有生物活性的His-VaEG45蛋白,为深入解析VaEG45蛋白参与小豆抗锈病的生理和分子机制提供基础。; 王慧鑫孙伟娜柯希望左豫虎; 关键词：小豆蛋白表达生物活性

一种瘤胃丁酸弧菌RnfC蛋白的原核表达纯化方法: 本发明属于蛋白分离纯化技术领域，具体涉及一种瘤胃丁酸弧菌RnfC蛋白的原核表达纯化方法。本发明将编码瘤胃丁酸弧菌RnfC蛋白的重组表达载体转入BL21(DE3)感受态细胞进行蛋白诱导表达；所述编码瘤胃丁酸弧菌RnfC蛋白...; 梁欢许兰娇瞿明仁王隆李文彬邢天鸽倪坚付坤

猪细小病毒NS蛋白的原核表达纯化及多克隆抗体的制备: 2024年; 通过构建猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)NS蛋白的原核表达载体,表达纯化重组NS蛋白并制备其多克隆抗体,用于阐明NS蛋白的生物学功能及在PPV病毒复制过程中的作用机制。研究通过扩增PPV的NS目的基因,并利用限制性内切酶Bam HI和Xho I进行双酶切,采用分子克隆构建方法构建至pET28a-sumo-NS,通过加入0.5 mol/L IPTG并设置不同诱导温度进行诱导表达,利用Ni-NTA纯化获得约71 ku的重组NS蛋白。以重组NS蛋白为抗原,混合佐剂皮下注射免疫BALB/c小鼠,获得抗NS的多克隆抗体,检测抗体效价达到1:32000,这将为后续研究PPV病毒复制机制及PPV疫苗的研发提供基础材料。; 聂晓宁单靖微陈龙欣孙悦田梦雪孔莉张丽萌; 关键词：NS基因原核表达蛋白纯化多克隆抗体

野生大豆肌醇磷酸水解酶Gs5PTase8的原核表达纯化及活性鉴定被引量：2: 2024年; 多磷酸肌醇-5-磷酸酶(inositol polyphosphate 5-phosphatase,5PTase)是肌醇信号传导途径中的关键酶,能水解肌醇磷酸(inositol phosphate,IP)或磷脂酰肌醇磷酸(phosphatidylinositol phosphates,PIP)的肌醇环5-磷酸。然而,大豆中该类基因研究较少。本研究从野生大豆(Glycine soja S.&Z.)中克隆出耐盐基因Gs5PTase8并对其底物进行探究。Gs5PTase8编码493个氨基酸。经序列比对与系统进化树分析,发现其在植物中具有保守性。利用实时荧光定量PCR对不同大豆组织分析该基因的表达,发现Gs5PTase8主要在大豆根中表达。为了探究其水解底物,分别构建了大肠杆菌表达载体pET28a-Gs5PTase8和pGEX4T1-Gs5PTase8,但只成功诱导表达了GST-Gs5PTase8重组蛋白。使用不同浓度异丙基β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside,IPTG),分别在16、30、37℃条件下进行诱导表达条件优化,发现重组蛋白在16℃、0.2 mmol/LIPTG过夜诱导时表达量最高。SDS-PAGE检测重组蛋白的相对分子量约为75 kDa,经纯化后条带单一,纯度达95%以上,二辛可酸法(bicinchoninic acid assay,BCA)检测出重组蛋白的得率为4.9 mg/L。体外底物酶活检测表明,Gs5PTase8蛋白可以水解IP3[inositol(1,4,5)trisphosphate]、IP_(4)[inositol(1,3,4,5)tetrakisphosphate]、PI(4,5)P_(2)[phosphatidylinositol(4,5)bisphosphate]和PI(3,4,5)P3[phosphatidylinositol(3,4,5)trisphosphate],本研究为进一步探索Gs5PTase8参与耐盐的分子作用机制提供了科学依据。; 陈媛范寒雨刘雨杭梁康迳林文雄贾琪; 关键词：大豆原核表达蛋白纯化

抗病毒免疫调节因子RNF2蛋白的生物信息学分析及原核表达纯化: 2024年; 目的 RNF2是一种转录抑制因子,其N端保守的RING结构域使其能够发挥E3泛素连接酶的功能。本研究采用生物信息学工具对人源RNF2蛋白进行序列和结构分析,同时在大肠埃希菌表达系统中进行高效表达与纯化,为后续探索其生物学功能和潜在的药物靶点奠定基础。方法利用ClustalX、Expasy、TMHMM及SignalP等软件对RNF2进行多序列比对、理化性质分析、跨膜区、信号肽及疏水性分析。通过分子克隆构建pGEX-4T-RNF2重组质粒,随后转入大肠埃希菌BL21(DE3)中进行目的蛋白的诱导表达。收集菌体后通过高压破碎释放重组蛋白,进一步使用GST亲和层析柱纯化。结果 RNF2全长共336个氨基酸,带负电,无跨膜区,无信号肽,属于亲水蛋白,且在不同物种中较为保守。成功构建了pGEX-4T-RNF2重组菌株,经IPTG诱导表达后,发现RNF2能够在BL21(DE3)中大量表达。GST层析柱纯化结果显示RNF2的挂柱效果较差,但仍能得到少量高纯度蛋白。结论使用大肠埃希菌原核表达系统成功获得性状较好的RNF2重组蛋白,为后续功能实验和药物开发奠定了基础。; 王琦张俊梅朱文菊谢环环解晓曼赵桂华徐超尹昆孙航董宏杰; 关键词：泛素化异源表达重组蛋白

抗多房棘球蚴亮氨酸氨基肽酶纳米抗体筛选及原核表达纯化: 2024年; 目的筛选抗多房棘球蚴亮氨酸氨基肽酶(Em-LAP)纳米抗体并构建该纳米抗体原核表达系统,表达纯化纳米抗体蛋白,获得高特异性抗多房棘球蚴亮氨酸氨基肽酶的纳米抗体。方法利用噬菌体文库展示技术(phage library display technology)筛选亮氨酸氨基肽酶纳米抗体,应用phage-ELISA法检测纳米抗体与靶蛋白的亲和力。将亲和力高的抗体测序后,串联目的序列并优化密码子,合成后接入表达载体pET30a做酶切鉴定。将重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)菌株,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的蛋白表达,表达的蛋白经金属螯合亲和层析纯化获得目的蛋白LAPNb。结果筛选出抗Em-LAP纳米抗体,构建了重组pET30a-LAPNb质粒,得到了一个大小约为28KD的LAPNb蛋白。结论本研究成功筛选获得了抗Em-LAP纳米抗体,构建了LAPNb原核表达系统,表达纯化了LAPNb蛋白。; 戴瑶刘文婧肖杨李润乐汤锋; 关键词：多房棘球蚴纳米抗体亮氨酸氨基肽酶

玉米黄花叶病毒运动蛋白的原核表达纯化与抗血清制备: 2023年; 为实现对玉米黄花叶病毒(maize yellow mosaic virus,MaYMV)的血清学检测,丰富该病毒的检测方法,将编码MaYMV运动蛋白(movement protein,MP)的基因连接到原核表达载体pDBHis-MBP上,将构建成功的原核表达质粒转化到大肠杆菌Escherichia coli中诱导表达融合蛋白,将纯化后的融合蛋白对新西兰大白兔Oryctolagus cuniculus进行免疫并制备MaYMV MP多克隆抗血清,并采用Western blot对抗血清的效价、灵敏度和特异性进行检测。结果显示,利用成功构建的原核表达载体经诱导表达获得分子量大小约为62 kD的融合蛋白,纯化后对新西兰大白兔进行免疫获得MaYMV MP抗血清,该抗血清的效价为1∶128000,灵敏度为1∶32,且该抗血清能够特异性地检测到本氏烟Nicotiana benthamiana中瞬时表达的MaYMV MP,而不与马铃薯卷叶病毒属Polerovirus及黄症病毒属Luteovirus的其他病毒发生血清学交叉反应,证明该抗血清具有良好的特异性。表明本研究制备的MaYMV MP抗血清能特异性地检测到MaYMV MP,可用于对田间样品的MaYMV血清学检测。; 马秋萌刘玉姿吴迪李洪蕊王颖韩成贵; 关键词：血清制备原核表达运动蛋白

猪丹毒杆菌表面抗原SpaA的原核表达纯化及免疫原性验证被引量：2: 2023年; 本研究制备了一种具备优良免疫原性的猪丹毒杆菌表面抗原重组蛋白。采用基因调取的方式,构建质粒并亚克隆到表达载体pET28a上,进一步将改造质粒转化到大肠杆菌感受态BL21细胞中,构建了1株猪丹毒SpaA全基因重组表达菌株。之后通过IPTG诱导表达、镍离子层析柱分离纯化、梯度透析获得高纯度重组SpaA蛋白。经免疫攻毒试验验证,重组SpaA蛋白能够有效保护小鼠和猪免于猪丹毒杆菌强毒攻击,其中小鼠的重组SpaA蛋白最小免疫剂量为每只2.0μg,100μg的重组SpaA蛋白能够保护猪免于猪丹毒杆菌强毒株感染。以重组SpaA蛋白作为组分与猪多杀性巴氏杆菌病活疫苗共同免疫小鼠,结果显示该混合疫苗对于猪丹毒杆菌及猪多杀性巴氏杆菌均有良好的保护效果。本研究结果证实,重组SpaA蛋白是我国现行猪丹毒杆菌传统灭活疫苗升级换代的理想候选抗原,同时也具备良好的抗原相容性,其高纯度及低免疫剂量的特点也为其他组分提供了充足的剂量空间。; 张一帜张媛李建王甲冯妍赵浩然任小侠王秀丽刘元杰李旭妮王浩杰刘燕; 关键词：猪丹毒杆菌蛋白表达纯化亚单位疫苗

猪重组RBP4蛋白可溶性原核表达纯化及生物学活性鉴定: 2023年; 视黄醇结合蛋白4(retinol binding protein,RBP4)是一种主要在肝脏细胞和脂肪细胞中合成和分泌的细胞因子。RBP4在机体的脂肪代谢、慢性炎症、胰岛素抵抗等疾病过程中发挥重要作用,最新的研究也发现其与病毒感染密切相关。为了获得可溶性猪重组RBP4蛋白,本研究克隆了猪rbp4(prbp4)基因,并成功构建了原核表达载体pET32a-pRBP4。将该原核表达载体转化至BL21(DE3)感受态细胞中,分别对诱导剂浓度、诱导时间、诱导温度及超声功率进行条件优化,结果显示重组pRBP4以0.5 mmol/L IPTG在16℃条件下诱导12 h能够获得最大量的可溶性蛋白。进一步研究发现,以60 mmol/L咪唑纯化重组蛋白可获得最高产量。利用纯化的重组pRBP4蛋白处理猪肺泡巨噬细胞,qPCR检测炎症因子表达情况,发现重组pRBP4可显著诱导IL-1β、TNFα及IL-6的表达,表明获得的重组蛋白具有良好的生物学活性。以上结果为深入研究pRBP4的生物学功能提供了有利的生物学候选工具。; 赵鹤娇韩庆兵商营利; 关键词：视黄醇结合蛋白4 原核表达可溶性表达蛋白纯化

海水多毛类参与再生功能的重组蛋白原核表达纯化方法及应用: 本发明公开海水多毛类参与再生功能的重组蛋白的原核表达纯化方法；本发明利用全基因合成基因序列并通过PCR扩增将含有限制性内切酶位点的产物插入到质粒中，构建pET‑30a‑His‑OxLumbricin原核表达载体；在温度为...; 陈软妮陈建明张钰霆

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