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BVDV NS5A蛋白在原核系统中的优化表达与纯化鉴定: 2025年; 本研究构建了牛病毒性腹泻病毒NS5A蛋白重组质粒并在原核表达系统中表达,但分析过程中发现其主要形式为包涵体,因此通过更换条件使BVDV NS5A蛋白可溶,同时可纯化出蛋白,为后面结构功能分析、抗体制备以及酶联免疫吸附实验奠定基础。以实验室保存的毒株为试验材料,采用逆转录PCR(reversetranscription PCR,RT-PCR)技术扩增NS5A基因,构建pET-28a-NS5A和pET-32a-NS5A表达质粒,转化于大肠杆菌BL21(DE3)和Rosetta gami 2(DE3)感受态细胞中,使用IPTG进行诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Western-blot分析,最后根据表达条件的摸索,纯化出可溶性的NS5A蛋白。成功克隆出了BVDV NS5A基因,序列全长为1 488bp,编码497个氨基酸,理论分子质量为55.8ku。成功构建了原核表达质粒pET-28a-NS5A和pET-32a-NS5A,其在大肠杆菌BL21(DE3)和Rosetta gami 2(DE3)可表达以包涵体形式为主的NS5A重组蛋白,分子质量分别约为61ku和75ku,经过体表达条件的摸索,pET-32a-NS5A质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中,经过25℃低温诱导出现较多可溶性,并纯化出NS5A蛋白。本研究成功克隆出了1 488bp的NS5A基因,经不同条件的诱导表达后,得到可溶性NS5A重组蛋白。; 高明阳杨宣叶吴玉湖王进千胡欣妍周建华; 关键词：牛病毒性腹泻病毒 NS5A蛋白原核表达可溶性

玉米大斑病菌效应因子StSse19基因的克隆、表达模式分析及在原核系统中的表达: 2024年; 玉米大斑病是由玉米大斑病菌引起的玉米叶部真菌性病害。本课题组前期通过对病菌侵染玉米的转录组分析发现,效应因子StSse19为重要的致病因子,但对其结构及功能尚不清晰。本研究以野生型菌株01-23的cDNA为模版,克隆StSse19并对其结构进行生物信息学预测;结合对病菌侵染玉米的RNA-Seq数据分析明确该基因的表达模式,进而利用qRT-PCR技术证实其表达模式;构建StSse19的融合表达载体pET28a-StSse19,在大肠杆菌BL21(DE3)中以IPTG诱导表达该目的基因,通过SDS-PAGE技术检测其表达情况。结果表明,StSse19的CDS序列由330个核苷酸组成,编码109个氨基酸残基,序列比对发现该蛋白无同源蛋白,表明其为大斑病菌的特异效应蛋白;对StSse19的表达模式分析发现,该基因在侵染玉米24 h的表达量显著提高,72 h表达量下降,推测该基因参与病菌的侵染过程;将StSse19在原核系统中进行表达,SDS-PAGE分析结果显示,该蛋白大小为28 kD,用Ni柱层析法结合Western blot检测显示获得了纯化的目的蛋白。该研究明确了StSse19基因的结构特征及表达模式、获得了StSse19在原核体系中的表达蛋白,为深入揭示其功能及作用机制奠定了基础。; 杨俊芳尹贵波周启慧刘玉卫巩校东谷守芹; 关键词：玉米大斑病菌原核表达 QRT-PCR

一种利用原核系统制备RNA的方法及其应用: 本发明公开了一种利用原核系统制备RNA的方法及其应用。所述方法包括：将目标基因和RNA结合蛋白的编码基因导入宿主细胞中进行培养及表达，进行产物纯化，得到RNA；所述目标基因的序列的5’端还包括RNA结合蛋白结合基序的序列...; 侯琳琳刘新建

在原核系统中同时增强目的蛋白质表达量和可溶性的方法: 本发明公开了在原核系统中同时增强目的蛋白质表达量和可溶性的方法，所述方法是通过使用基于Vip3蛋白质信号肽序列或其局部序列的新型融合标签，引导目的蛋白质的表达。由这类融合标签和目的蛋白质的编码基因形成的融合基因与大肠杆菌...; 高建华欧阳春平赵娟丽王兴春

一种增强原核系统中蛋白质表达的方法: 本发明公开了一种能够改善原核系统中目的蛋白质表达的方法，所述方法是通过使用特定蛋白质的信号肽序列或信号肽序列的突变序列或信号肽序列的嵌合序列或人工模拟设计的多肽序列引导目的蛋白质的表达，从而提高目的蛋白质在表达系统中的表...; 高建华王兴春李旭凯钱红梅

原核系统中环状多核糖核苷酸的产生: 本披露总体上涉及用于产生、纯化、和使用来自原核系统的环状RNA的方法。; 巴里·安德鲁·马丁斯维塔·斯里尼瓦萨·穆拉利牛雅杰德里克·托马斯·罗森赫伯米奇卡·加布里埃尔·夏普安德鲁·麦金利·舒梅克

在原核系统中同时增强目的蛋白质表达量和可溶性的方法: 本发明公开了在原核系统中同时增强目的蛋白质表达量和可溶性的方法，所述方法是通过使用基于Vip3蛋白质信号肽序列或其局部序列的新型融合标签，引导目的蛋白质的表达。由这类融合标签和目的蛋白质的编码基因形成的融合基因与大肠杆菌...; 高建华欧阳春平赵娟丽王兴春

不同来源脲酶在原核系统中的表达研究: 脲酶（EC3.5.1.5）是人类发现的第一种含镍金属酶，可以催化尿素最终水解生成铵和碳酸盐，目前生物矿化领域应用最多的产脲酶菌主要是巴氏芽孢八叠球菌。但是，截至目前为止，关于野生八叠球菌分子改造的报道少见。通过亚硝基胍化...; 庞慧敏; 关键词：脲酶密码子优化原核表达

胰高血糖素样肽-1融合蛋白在原核系统中的表达被引量：1: 2020年; [目的]构建点突变的GLP-1^Gly8,并与人血清白蛋白(HSA)结构域Ⅰ融合,延长GLP-1的半衰期。[方法]采用常规PCR扩增白蛋白结构域Ⅰ片段,利用SOE-PCR扩GLP-1^Gly8基因并将两个基因拼接,得到的HSA-GLP-1^Gly8融合基因经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后连接到pET30a表达载体,重组质粒pET30a-HSA-GLP-1^Gly8转入E.coli BL21(DE3)宿主菌中进行IPTG诱导表达。[结果]PCR扩增分别获得140 bp的GLP-1^Gly8基因499 bp的HSA的片段及经融合后的HSA-GLP-1^Gly8基因。表达载体pET30a-HSA-GLP-1^Gly8在E.coli BL21(DE3)宿主菌中经IPTG诱导,过表达了分子量约为22 kDa的融合蛋白。[结论]成功构建了pET30a-HSA-GLP-1^Gly8原核表达载体,融合蛋白在BL21(DE3)菌中以包涵体的形式过表达。; 桑延霞张军军; 关键词：胰高血糖素样肽-1 融合蛋白原核表达人血清白蛋白

一种增强原核系统中蛋白质表达的方法: 本发明公开了一种能够改善原核系统中目的蛋白质表达的方法，所述方法是通过使用特定蛋白质的信号肽序列或信号肽序列的突变序列或信号肽序列的嵌合序列或人工模拟设计的多肽序列引导目的蛋白质的表达，从而提高目的蛋白质在表达系统中的表...; 高建华王兴春李旭凯钱红梅

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