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拟除虫菊酯类农药单链可变区抗体的制备、鉴定及其特异性分析被引量：1: 2017年; 目的制备拟除虫菊酯类农药可溶性单链可变区(single-chain fragment variable,scFv)抗体,鉴定其免疫活性并对其特异性进行分析。方法构建表达载体pET28a(+)-scFv和pET42a(+)-scFv并转化BL21(DE3),重组菌经诱导后通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定目的蛋白的表达。可溶性融合蛋白scFv/GST经Glutathione Sepharose 4B纯化后用FactorXa切除GST标签获得scFv,然后采用Western blotting法对其进行鉴定。scFv对7种拟除虫菊酯类农药的特异性采用间接竞争酶联免疫法进行分析。结果经0.1mmol/LIPTG诱导后,重组菌BL21(DE3)-p ET28a(+)-scFv和BL21(DE3)-pET42a(+)-scFv表达的目标蛋白分别为包涵体抗体和部分可溶性抗体。经鉴定,可溶性scFv相对分子量约为30k Da,效价为1:25600。同源半抗原Hap1对单链抗体sc Fv的IC50为2.43μg/mL,检出限为0.045μg/mL;scFv抗体对氯菊酯、氯氰菊酯、溴氰菊酯均有较高特异性,IC50分别为3.29、4.72和5.55μg/mL。结论本研究成功获得了拟除虫菊酯类农药的可溶性单链可变区抗体,该抗体对3种拟除虫菊酯农药具有很强的特异性,该研究可为拟除虫菊酯类农药多残留免疫分析提供依据。; 吴元元金朵付骋宇祁志军; 关键词：拟除虫菊酯类农药单链可变区抗体

基于单链可变区抗体的拟除虫菊酯类农药多残留酶联免疫分析研究: 拟除虫菊酯类杀虫剂是以天然除虫菊素为先导物仿生合成的一类广谱性杀虫剂，具有光稳定、高效、低毒、药效时间长等优点，被广泛应用于农林害虫、家用卫生及畜禽养殖害虫防治等领域，目前已与有机磷、氨基甲酸酯类农药并称为使用最广的三大...; 吴元元; 关键词：拟除虫菊酯杀虫剂酶联免疫气相色谱农药残留; 文献传递

抗生物素化三聚氰胺人源单链可变区抗体筛选与鉴定: 2016年; 目的筛选生物素化三聚氰胺人源单链可变区(scFv)抗体,为研究相关快速检测试剂盒创造条件。方法本试验利用生物素化三聚氰胺为包被抗原,从半合成噬菌抗体库中筛选其特异性噬菌体抗体片段。即采用菌噬体表面展示技术,以链亲和素-生物素标记的三聚氰胺为固相包被靶抗原,把靶抗原包被在免疫平板上,加入噬菌体抗体库,则头部带有能与靶抗原特异性结合的抗体分子的噬菌体就被固定在免疫平板上,不能特异结合的噬菌体则被漂洗掉;将特异结合的噬菌体洗脱下来,侵染大肠杆菌,就可以得到含抗体基因的噬菌粒。结果从半合成的菌噬体单链可变区抗体库中经过3轮"吸附-洗脱-扩增"筛选过程后,获得抗原特异性和结合性较强的生物素化三聚氰胺scFv片段。结论酶联免疫吸附试验等进行鉴定后,筛选得到了抗生物素化三聚氰胺的噬菌体抗体基因片段,为下一步亲和力鉴定、蛋白表达及开发相关检查试剂盒奠定了基础。; 马巍娜刘雪林宋宏彬沈建良黄友章刘毅向丹; 关键词：噬菌体表面展示技术三聚氰胺人源单链可变区抗体生物素化

抗AEG-1单链可变区抗体的原核表达及纯化: 2015年; 目的构建抗星形细胞上调基因1(AEG-1)单链可变区抗体(V23)的原核表达载体,并对表达蛋白进行纯化及免疫活性检测。方法应用Primer5软件设计针对抗AEG-1单链可变区抗体基因序列的引物,构建PRsetC/V23原核表达质粒,经限制性内切酶Pst1酶切以及DNA测序鉴定正确后,将原核表达质粒导入大肠杆菌BL21中,构建含V23基因的原核表达工程茵。经IPTG诱导后,用带His标签的磁珠纯化目的蛋白,SDS-PAGE电泳检测目的蛋白含量,Western blot及ELISA检测抗AEG-1单链可变区抗体的免疫活性。结果构建的原核表达质粒PRsetC/V23经单酶切和测序分析显示,构建的V23基因与设计序列100%一致。IPTG诱导后,SDS-PAGE电泳显示在31×103处出现一条明显蛋白条带,Western blot检测在80×103处出现AEG-1特异反应条带,ELISA检测显示阳性结果。结论成功构建了PRsetC/V23原核表达质粒及V23原核表达工程茵,该工程茵可表达抗AEG-1单链可变区抗体蛋白,且该蛋白具有良好的免疫活性。; 路蔓刘昕阳龙敏王琛刘冲郜赵伟欧阳永日陈曦张惠中; 关键词：单链可变区抗体原核表达

重组腺相关病毒介导的抗表皮生长因子受体单链可变区抗体对胰腺癌的基因治疗: 胰腺癌恶性程度高，预后差，早期诊断困难，只有很少部分患者可以进行手术治疗，大部分患者发现病情时已经失去手术机会，传统的放疗和化疗手段疗效不佳。所以，我们开始探索新的途径来医治胰腺癌。表皮生长因子受体(EGFR)在多种实质...; 万世奇; 关键词：胰腺癌表皮生长因子受体基因治疗; 文献传递

人源结缔组织生长因子单链可变区抗体片段的筛选被引量：4: 2007年; 目的:从人源单链可变区片段(ScFv)文库中筛选与结缔组织生长因子(CTGF)特异结合的噬菌体克隆,获得ScFv氨基酸序列。方法:以重组硫氧化还原蛋白-结缔组织生长因子(TrxA-CTGF)融合蛋白为靶目标,用差异吸附法,逐步增加选择压力,经过4轮亲和筛选后随机挑取8个克隆,提取DNA后测序;测序阳性的DNA转化E.coliHB2151,IPTG诱导后用间接ELISA方法检测培养上清单链抗体的活性。MTT法测定单链抗体对CTGF促人近曲肾小管上皮HK-2细胞增殖作用的影响。结果:从8个克隆中获得7个完全一致的DNA序列(W0616);另有1个克隆丢失了重链,且轻链框架区(FR)和互补决定区(CDR)序列与W0616不一致;阳性克隆经诱导后,培养上清用间接ELISA试验证实能与CTGF发生特异性结合,与TrxA及阴性对照比较差异显著(P<0.001)。同时,该单链抗体片段能明显抑制CTGF引起的HK-2细胞的增殖。结论:成功获得与CTGF特异结合的人源单链抗体可变区序列,为CTGF抑制剂的研究奠定基础。; 吴国球刘乃丰赵桂琴范小波张臣王明虹; 关键词：结缔组织生长因子噬菌体展示

表达人抗表皮生长因子受体单链可变区抗体的重组腺相关病毒载体的构建及胰腺癌细胞株对C225敏感性的评价: 背景：胰腺癌早期诊断难，恶性程度高，预后差，传统的治疗手段效果有限，总的5年生存率不足5％。包括EGFR靶向治疗和基因治疗在内的一些新的治疗手段迅速发展：抗EGFR单克隆抗体可以竞争性结合EGFR，阻断EGFR信号通路，...; 杜辉; 关键词：表皮生长因子受体单链可变区抗体胰腺癌西妥昔单抗; 文献传递

抗细粒棘球蚴B抗原人源单链可变区抗体临床诊断价值的初步研究: 2005年; 目的　评价人源单链可变区抗体(ScFv)诊断细粒棘球蚴病的临床价值。方法　用Western-blot检测ScFv识别的抗原表位,并检测该抗体与包虫病病人囊液、血清中循环抗原的结合,与其它肝占位疾病患者血清、正常人血清的交叉反应。结果　ScFv识别囊液抗原位点单一,特异性优于多克隆抗体,交叉反应低,但检测囊液及血清循环抗原的敏感性低于多克隆抗体。结论　对临床使用ScFv诊断进行了初步尝试,直接ELISA法检出率不高,应改进为双抗体夹心法或多种抗体铺底捕获法来检测循环抗原。; 陈新华温浩张金辉林仁勇张琰张静萍郑树森; 关键词：单链可变区抗体

抗棘球蚴人源单链可变区抗体抑制人体包虫原头节的初步实验: 2004年; 目的　建立人体包虫原头节的体外培养模型 ,评价抗棘球蚴人源单链可变区抗体(ScFv)抑制人体包虫原头节的效果。方法　无菌抽取人体包虫囊肿原头节 ,与ScFv高 (1mg/L)、中(0 .1mg/L)、低 (0 .0 1mg/L)剂量组和对照组 (等量的培养液 )共同培养 ,比较各组原头节死亡率和残余ScFv浓度 ,观察原头节形态学改变。结果　高剂量ScFv组原头节死亡率与对照组的差异均有统计学意义 (P <0 .0 1) ,但中、低剂量组与对照组死亡率的差异无统计学意义 (P >0 .0 5 ) ,随作用天数增加 ,高剂量ScFv组原头节结构逐渐被破坏、皱缩、崩解。结论　该ScFv具备体外抑制人体原头节的作用 ,其抑制作用与剂量和时间有关。; 陈新华温浩刘辉张琰阿孜古丽·吐尔逊林仁勇张金辉马旭东郑树森; 关键词：原头节人源单链可变区抗体高剂量棘球蚴

噬菌体表面展示技术筛选HCBP6人源单链可变区抗体被引量：9: 2003年; 目的:制备丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白的肝细胞结合蛋白6(HCBP6)的特异性人源化单链可变区抗体(scFv)。方法:采用噬菌体表面展示技术,将生物合成的应用酵母双杂交技术筛选得到的HCV核心蛋白的肝细胞结合蛋白6(HCBP6)16肽固相包被于Nunc板,从噬菌体单链可变区抗体库中经过5轮“黏附-洗脱-扩增”筛选过程,随机挑选出48个克隆,利用酶联免疫黏附法(ELISA)、交叉反应和竞争抑制实验,对其进行免疫学检测,获得与HCBP6结合活性较强的单链可变区抗体片段的阳性克隆,并对HCBP6特异性scFv的编码序列进行序列测定分析。结果:对噬菌体单链可变区抗体库经过5轮“黏附-洗脱-扩增”的筛选后,结合到包被平皿的噬菌体与第一轮相比,富集了162倍。用酶联免疫黏附法测定第5轮筛选后上清液中含有的噬菌体抗体与HCBP6结合活性。其中有30株克隆ELISA的吸光度(A450 nm)值较高(P8 nm 0.77,P240.714,P26 0.728,P29 0.723,P38 0.803,P39 0.762,P43 0.747等)。对这些噬菌体抗体进行与牛血清白蛋白(BSA)的交叉反应后,确定其中有7株交叉反应较弱(P80.145,P24 0.119,P26 0.17,P29 0.186,P38 0.118,P39 0.138,P43 0.178),结合2次ELISA重复实验的/4值及竞争抑制实验结果,最后确定1株(P24)阳性克隆。提取质粒,SfiI/NotI双酶切后,将片段亚克隆到pCANTABSE载体,进行DNA序列测定,DNA大小为771 bp,符合人源化单链可变区抗体典型的骨架区(FR)及互补决定区(CDR)的序列结构。结论:用噬菌体抗体库技术能够成功地获得HCBP6的scFv。; 钟彦伟成军张忠东孙敏李强李克王琳李莉张玲霞陈菊梅; 关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白噬菌体表面展示技术酵母双杂交技术

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