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软枣猕猴桃L-半乳糖内酯脱氢酶基因的克隆及原核表达分析被引量：2: 2019年; 为更好了解L-半乳糖内酯脱氢酶及编码基因在软枣猕猴桃中的生理功能及作用,以‘魁绿’软枣猕猴桃果实cDNA为模板,用RT-PCR及RACE技术,获得L-半乳糖酸-1,4-内酯脱氢酶基因AaGalLDH(GenBank:KP145007.1)。序列分析表明该基因全长为2394 bp,开放阅读框为1833 bp,编码610个氨基酸,与其它植物GalLDH氨基酸序列具有78%~95%的同源性。编码的蛋白序列具有GalLDH蛋白家族典型的保守结构域。进一步将该基因连接到原核表达载体并转化大肠杆菌进行诱导表达,经Western Blotting验证,目的基因在pET-28a表达系统中有表达,但基本为不溶性表达。这为进一步研究该酶蛋白的体外表达和功能以及选育高品质软枣猕猴桃品种奠定了基础。; 张庆田范书田艾军秦红艳; 关键词：软枣猕猴桃维生素C 克隆基因表达

软枣猕猴桃L-半乳糖内酯脱氢酶基因及其表达方法: 本发明涉及生物技术领域，具体而言，涉及一种软枣猕猴桃L?半乳糖内酯脱氢酶基因及其表达方法。本发明所用的软枣猕猴桃品种为“魁绿”。本发明包括(1)克隆一种软枣猕猴桃L?半乳糖内酯脱氢酶基因；(2)提供该基因及其编码蛋白的序...; 张庆田范书田杨义明李晓艳艾军; 文献传递

毛花猕猴桃果实L-半乳糖内酯脱氢酶基因cDNA片段的克隆与序列分析被引量：3: 2011年; 毛花猕猴桃果实中Vc含量极高,为了揭示毛花猕猴桃Vc形成规律,根据已知植物的L-半乳糖内酯脱氢酶(GalLDH)基因,设计简并引物,以毛花猕猴桃新品种‘华特’果实为材料提取总RNA,采用RT-PCR法,克隆出一条长661 bp的cDNA片段,根据测序结果推测其氨基酸序列,并与刺梨、拟南芥、甘薯和草莓等植物的GalLDH基因编码的氨基酸序列进行亲缘分析。结果表明,所克隆片段编码氨基酸序列与美味猕猴桃GalLDH相似度高达99%,其在同源基因进化关系上聚为一类,与葡萄的GalLDH相似性高达91%,与草莓、刺梨、甘薯、温州蜜柑、拟南芥、甜瓜等植物的GalLDH同源性均在80%以上,可知克隆到的核苷酸片段确为毛花猕猴桃GalLDH基因的cDNA片段。; 燕标吴延军谢鸣叶爱华; 关键词：毛花猕猴桃

刺梨半乳糖内酯脱氢酶的酶促反应条件优化: 2010年; 为进一步探明刺梨半乳糖内酯脱氢酶（GalLDH）的作用机理及其对维生素C（AsA）合成效率的影响,以高AsA果实刺梨为材料,研究了AsA合成关键酶——GalLDH酶促反应的动力学参数。结果表明,刺梨GalLDH反应的最适温度在30℃左右,最适pH值为8.3-9.4,以半乳糖内酯作为反应底物的Km为0.031 mM,最大反应速率Vmax=0.026 U/s。当以古洛糖内酯作为反应底物时,GalLDH也能表现约70%的活性。; 刘卫黄伟安华明杨曼张雪; 关键词：刺梨半乳糖内酯脱氢酶动力学特征酶促反应

水稻L-半乳糖内酯脱氢酶基因的克隆和原核表达及抗体的制备被引量：4: 2010年; 应用RT-PCR技术从水稻叶片中克隆了水稻L-半乳糖内酯脱氢酶(GLDH)的全长基因.序列分析表明,水稻GLDH基因全长1752bp,亚克隆其部分成熟蛋白编码基因(789bp),利用基因重组技术构建了E.coli/pET30a-GLDHe,经酶切鉴定,DNA测序,证实重组质粒构建正确;将重组质粒转化大肠杆菌Rosseta,IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析证实表达出相对分子质量约为36000的蛋白.用原核表达蛋白作为抗原免疫家兔制备抗体,用Westernblot检测抗体的特异性及效价,结果表明,抗体血清效价为1∶1000,在加IPTG诱导后的菌液中可以检测到相应的蛋白条带((相对分子质量为36000)),在水稻叶片样品中能检测到1条相对分子质量为36000的蛋白条带.; 俞乐刘拥海彭新湘; 关键词：水稻原核表达抗体

植物抗坏血酸合成的关键酶:L-半乳糖内酯脱氢酶(GLDH)被引量：10: 2009年; 本文从酶的催化反应、酶学特征、分子生物学特性等方面介绍植物抗坏血酸合成的关键酶L-半乳糖内酯脱氢酶的研究进展。; 俞乐刘拥海李充壁; 关键词：植物抗坏血酸基因表达抗逆性

水稻L-半乳糖内酯脱氢酶基因的功能分析: L-半乳糖内酯脱氢酶(L-galactono-1,4-lactone dehydrogenase,简称GLDH)直接氧化L-半乳糖内酯生成抗坏血酸(AsA),GLDH位于植物细胞的线粒体内膜上,是植物AsA生物合成途径中...; 俞乐; 关键词：水稻 RNA干涉基因调控; 文献传递

刺梨半乳糖内酯脱氢酶的序列特征和部分反应特性被引量：2: 2008年; 分析和研究了从刺梨中克隆的维生素C合成关键酶半乳糖内酯脱氢酶的氨基酸序列特征及其基本生化反应特性.结果表明,该基因含有一段线粒体靶信号肽序列、2个跨膜区、一个典型的FAD结合域以及1个天冬酰胺糖基化位点、8个蛋白激酶C磷酸化位点、11个酪蛋白激酶2磷酸化位点、2个酪氨酸激酶磷酸化位点和4个N端十四(烷)酰化位点等潜在功能性或翻译后修饰位点.丫啶黄素显著抑制GalLDH活性,二价金属盐CuSO4和ZnSO4有部分抑制作用,而石蒜碱几乎没有作用.; 安华明黄伟樊卫国刘庆林陈力耕; 关键词：刺梨半乳糖内酯脱氢酶维生素C 生化特性

毛花猕猴桃果实L-半乳糖内酯脱氢酶cDNA片段的克隆与序列分析: 特’猕猴桃是从野生毛花猕猴桃中选育出的新品种,平均单果质量82.00 ～94.37 g,是野生种的2～4倍,最大132.2 g.可溶性固形物含量14.7％,可滴定酸1.24％,VC 6.28 mg/g.毛花猕猴桃中VC含...; 吴延军谢鸣燕标陈俊伟张慧琴徐红霞; 关键词：KIWIFRUIT

猕猴桃果实L-半乳糖内酯脱氢酶和脱氢抗坏血酸还原酶cDNA片段的克隆与序列分析被引量：11: 2007年; 克隆猕猴桃果实L-半乳糖内酯脱氢酶(GalLDH)和脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)基因,可为揭示猕猴桃高抗坏血酸(AsA)含量的分子机制奠定基础。研究以猕猴桃果实为材料提取总RNA,采用RT-PCR法,克隆出L-GalLDH基因的cDNA片段857 bp和DHAR基因的cDNA片段594 bp并测序,根据测序结果推测其氨基酸序列,并与刺梨、拟南芥、花椰菜、甘薯和草莓等植物的GalLDH基因和DHAR基因氨基酸序列进行亲缘分析。结果表明,猕猴桃GalLDH基因氨基酸序列和核苷酸序列与刺梨的相似性高达88%,其在同源基因进化关系树中单独聚为一类;DHAR基因氨基酸序列和核苷酸序列与苹果的相似性高达98%和99%,两者在进化关系上聚为一类。可知克隆到的2个核苷酸片段确为猕猴桃L-GalLDH和DHAR基因cDNA片段,同源基因植物亲缘关系聚类与传统的形态分类有一定的差异。; 牛歆雨雷玉山梁东马锋旺王西锐; 关键词：猕猴桃

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