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全悬浮培养ST细胞增殖猪瘟兔化弱毒株的工艺研究: 2024年; 本试验利用生物反应器对ST细胞全悬浮培养参数以及猪瘟病毒的繁殖工艺进行探索。从培养基、细胞接种浓度、病毒接毒量三个方面进行工艺优化,放大培养,建立了猪瘟病毒的全悬浮培养工艺。结果表明:当细胞接种浓度为1.0×10^(6)/mL、病毒接毒MOI为0.05、采用培养基1进行培养时,病毒含量达到10^(7.5)FAID_(50)/mL,工艺验证两次,结果都符合要求,稳定可靠,为猪瘟疫苗大规模全悬浮培养奠定了基础。; 张惠云; 关键词：ST细胞猪瘟病毒

不同浓度血清对猪瘟兔化弱毒株感染滴度的影响被引量：1: 2022年; 为了探讨不同浓度血清对猪瘟兔化弱毒株感染PK-15细胞后感染力的影响,确定猪瘟兔化弱毒株(HCLV)感染PK-15细胞最适宜的血清浓度,试验设置了0%、2%、6%和10%4种不同浓度血清确定其对猪瘟兔化弱毒株感染PK-15细胞感染力的影响,对不同浓度血清和不同收获次数的病毒含量进行测定,并利用统计学软件分析比较不同收获时间、不同浓度血清的病毒含量差异,确定影响病毒含量的主要因素。结果表明:不同浓度的血清对猪瘟病毒感染细胞的感染力有影响。含6%胎牛血清的培养基更适合用于猪瘟兔化弱毒感染PK-15细胞的试验。; 潘晓梅王遵宝候凤周涛张慧敏侯红娟毛丽萍贺笋; 关键词：猪瘟病毒猪瘟兔化弱毒 PK-15细胞血清浓度 TCID50

基于mRNA-Seq技术分析猪瘟兔化弱毒株感染家兔后脾脏转录组学变化被引量：1: 2021年; 为了探究猪瘟兔化弱毒株(Chinese strain, C株)在家兔体内的病毒清除机制,试验以新西兰兔为材料,适应性喂养7 d后随机分为3组,即1个对照组和2个试验组,每组6只。2个试验组家兔分别在感染C株后第5天和第9天耳缘静脉注射空气处死,取出脾脏,获得T1和T2样本,采用TRIzol法提取脾脏总RNA,利用mRNA-Seq技术对家兔脾脏进行转录组测序与分析,以正常家兔基因组为参考,筛选出差异表达基因并进行GO功能富集分析和KEGG信号通路分析,并利用实时荧光定量PCR方法对部分差异基因进行验证。结果表明:与对照组相比,感染C株后T1样本获得的上调基因和下调基因分别有61个和25个,T2样本分别有22个和8个。T1样本差异基因映射到109个GO条目,T2样本差异基因映射到61个GO条目,T1和T2样本差异基因均富集到代谢过程和细胞进程。T1样本差异基因主要富集在趋化因子信号通路、细胞因子与其受体通路、细胞周期通路、RIG-Ⅰ样受体信号通路和Toll样受体信号通路,T2样本差异基因主要富集在精氨酸和脯氨酸代谢通路、维生素B6代谢通路以及钙信号通路。实时荧光定量PCR验证结果与mRNA-Seq技术的分析结果基本一致。说明家兔感染C株后,T1样本主要通过免疫反应抵抗、清除病毒,T2样本主要通过细胞代谢相关基因的调控来恢复机体细胞的正常功能。; 邓玲聪廖青邓吉平纪佳雨袁露露许道军; 关键词：脾脏 MRNA-SEQ

快速选育猪瘟兔化弱毒株(C株)ST敏感细胞系的方法及专用引物: 本发明公开了一种用逆转录PCR(RT‑PCR)技术和实时荧光定量RT‑PCR技术快速选育猪瘟兔化弱毒株(C株)ST(猪睾丸)敏感细胞系的方法。包括1)获得ST单克隆细胞；2)接种猪瘟兔化弱毒株(C株)；3)提取连续收获的...; 商晓桂张贵刚郝鹏魏学峰刘国英范秀丽韩志玲宋志刚孔彩萍王艳杰

猪瘟兔化弱毒株(C株)ST敏感细胞的克隆和鉴别被引量：2: 2019年; 本研究采用有限稀释法将ST细胞进行克隆,将获取的单克隆细胞放大培养后接种猪瘟兔化弱毒株(C株),通过实时荧光定量RT-PCR技术定量检测毒液中病毒含量,筛选对猪瘟兔化弱毒株敏感的细胞株。试验结果获得D3株、C4株、C8株、D5株、E10株、E11株、F9株和H9株共8株ST单克隆细胞。其中,C4株和E11株细胞对C株高度易感,收获毒液RNA拷贝数能够维持在106 copies/mL,并且高峰期毒液拷贝数可达107 copies/mL。; 商晓桂韩志玲毕力格高永伟闫聪郝鹏张贵刚刘国英; 关键词：克隆实时荧光定量RT-PCR

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒TJM-F92疫苗株对猪瘟兔化弱毒株的间隔免疫干扰研究: 2017年; 为研究高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)TJM-F92疫苗株对猪瘟病毒(CSFV)C株的间隔免疫干扰情况,本实验设计在免疫高剂量PRRSV TJM-F92株疫苗毒后第7 d和第14 d分别免疫低剂量CSFV C株疫苗毒,并于CSFV C株疫苗毒免疫后第14 d用CSFV石门系血毒攻击实验动物,通过体液免疫水平、免疫攻毒保护水平及病理学变化等方面进行评价。结果表明,间隔7 d免疫组与间隔14 d免疫组CSFV ELISA抗体水平与CSFV C株单独免疫对照组抗体水平无显著差异;攻击CSFV石门系血毒后,间隔7 d免疫组与间隔14 d免疫组均未出现猪瘟临床症状,组织器官病理变化轻微,对CSFV石门系血毒攻击可产生良好的保护效果。CSF阴性对照组实验动物5/5表现出猪瘟明显临床症状并全部死亡。以上结果表明,高剂量PRRSV TJM-F92疫苗株与低剂量CSFV C株间隔7 d或14 d免疫,PRRSV TJM-F92株对CSFV C株无免疫干扰作用。; 夏铭崎薛青红王炜李真光崔力凡宋妮封腾武莹季烨陈凤印春生武华; 关键词：PRRSV CSFV C株

高剂量高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒TJM-F92疫苗株对低剂量猪瘟兔化弱毒株的免疫干扰研究: 2017年; 为研究高剂量高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)TJM-F92疫苗株对低剂量猪瘟病毒(CSFV)C株是否存在免疫干扰作用,本研究对不同方式免疫动物从体液免疫水平、免疫攻毒保护水平及病理学变化等方面进行免疫干扰评价。结果表明,高剂量PRRSV TJM-F92疫苗株与低剂量CSFV C株联合免疫组CSFV抗体水平与低剂量CSFV C株单独免疫对照组CSFV抗体水平无显著差异,联合免疫组中高剂量PRRSV TJM-F92株未抑制低剂量CSFV C株抗体生成;攻击CSFV石门血毒后,联合免疫组与低剂量CSFV C株单独免疫对照组均未出现猪瘟临床症状,组织器官病理变化轻微,两组免疫组均可对CSFV石门系血毒攻击产生良好的保护效果。阴性对照组实验动物均表现出猪瘟明显临床症状并全部死亡。本研究表明,高剂量PRRSV TJM-F92株对低剂量CSFV C株无免疫干扰作用。本研究为PRRSV免疫防制措施的制定提供了实验依据。; 夏铭崎王炜印春生王鑫和彦良师新川武莹封腾陈凤薛青红武华; 关键词：PRRSV CSFV C株

快速选育猪瘟兔化弱毒株(C株)ST敏感细胞系的方法及专用引物: 本发明公开了一种用逆转录PCR(RT‑PCR)技术和实时荧光定量RT‑PCR技术快速选育猪瘟兔化弱毒株(C株)ST(猪睾丸)敏感细胞系的方法。包括1)获得ST单克隆细胞；2)接种猪瘟兔化弱毒株(C株)；3)提取连续收获的...; 商晓桂张贵刚郝鹏魏学峰刘国英范秀丽韩志玲宋志刚孔彩萍王艳杰

基于高通量测序技术分析家兔感染猪瘟兔化弱毒株后脾脏的转录组学变化被引量：9: 2016年; 本研究基于高通量测序技术对感染猪瘟兔化弱毒株(C株)后0h,12h,24h,30h,36h,48h的家兔脾脏组织进行测序,以家兔基因组作为参考,筛选感染后各时间点和对照组(0h)之间的差异基因。利用Uniprot和NCBI数据库查找各组中变化水平显著的前10个差异基因的生物学功能。结果发现,感染后12h,24h,30h的前10个差异基因只有少数与炎症、免疫、凋亡等相关;感染后36h,48h的前10个差异基因完全相同,其中B2M、RLA-DR-ALPHA、CD74和IGJ参与抗病毒过程。GO功能注释结果显示:感染后各时间点的差异基因都和免疫、代谢、调控途径紧密相关。KEGG通路富集分析发现,感染后24h的差异基因富集到RIG-I样受体信号通路,感染后30h的差异基因富集到黏着斑和细胞外基质-受体相互作用通路,感染后36h和48h的差异基因共同富集到的通路有20个,其中蛋白酶体,溶酶体,核糖体,趋化因子信号通路,B细胞受体信号通路,抗原加工提呈通路和FcγR介导的吞噬通路与抗病毒相关。本研究建立的家兔感染C株后脾脏组织的差异表达基因数据库,将为进一步阐述家兔适应C株的分子机制奠定基础。; 侯玉臻赵丹彤刘国英贺番刘斌付绍印郝永清张文广

PIC猪经口、鼻途径感染猪瘟石门毒株及兔化弱毒株后病毒的组织嗜性及动态分布规律研究被引量：1: 2014年; 猪瘟（classical swine fever,CSF）是由猪瘟病毒（classical swine fever virus,CSFV）引起的一种高度接触性、症状差异极大的传染病〔1〕。病原属黄病毒科（Flaviviridae）瘟病毒属（Pestivirus）成员,只有一个血清型〔1〕。瘟病毒属（Pestivirus）是一群小的、有囊膜的、正链单股RNA病毒,其基因组大小约12.5kb,编码1个大的单一开放读码框架（ORF）,; 姚俊高林熊和丽肖雷李富祥杨荣丽李华春; 关键词：组织嗜性 FLAVIVIRIDAE 开放读码框架黄病毒科

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