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一种脓肿分枝杆菌病候选疫苗蛋白、制备方法及应用
本发明提供一种脓肿分枝杆菌病候选疫苗蛋白、制备方法及应用,属于脓肿分枝杆菌病疫苗技术领域。所述脓肿分枝杆菌病候选疫苗蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。本发明所提供的脓肿分枝杆菌病候选疫苗蛋白MAB_2734c...
于霞黄海荣孔瑶瑶谷玉珍武靖
通用流感mRNA候选疫苗的构建及免疫效果评价
2024年
目的构建通用流感mRNA疫苗并全面评价其免疫保护效果。方法优化流感病毒株A/California/04/2009的血凝素(hemagglutinin,HA)、核蛋白(nucleoprotein,NP)和基质蛋白2胞外区(matrix protein 2 ectodomain,M2e)抗原序列,并将HA、NP和3个串联的M2e(3M2e)分别克隆至pcDNA3.1载体,通过线性化、体外转录、酶学法加帽、酶促加尾合成mRNA,命名为mRNA-HA、mRNA-NP和mRNA-3M2e。3种mRNA分别转染293T细胞后,通过免疫荧光实验鉴定蛋白的表达。利用脂质纳米颗粒分别包裹mRNA-HA、mRNA-NP和mRNA-3M2e并测量其粒径和电位。再将3种mRNA等体积混合制备成Comb-mRNA疫苗。将28只6周雌性Balb/c小鼠(体质量为18~22 g)按简单随机分组法分为2组:LNP组(n=14)和Comb-mRNA组(n=14)。通过血凝抑制(hemagglutination inhibition,HI)、微量中和(microneutralization,MN)实验评价流感mRNA疫苗诱导小鼠产生的血清抗体滴度;通过流式细胞术评价Comb-mRNA疫苗诱导的细胞免疫反应。采用5LD_(50)野生型H1N1流感病毒株感染小鼠评价Comb-mRNA疫苗的免疫保护效果。结果成功构建mRNA-HA、mRNA-NP和mRNA-3M2e,且3种mRNA均能在293T细胞表达。脂质纳米颗粒包裹mRNA平均粒径为(119.53±6.5)nm,平均电位为(-8.23±1.3)mV。与LNP组比较,Comb-mRNA组疫苗的HI几何平均滴度(geometric mean titer,GMT)达179.6,MN的GMT达201.6,同时诱导IFNγ+CD4+/CD8+T细胞比例升高。Comb-mRNA组在加强免疫后2周能够提供对5LD_(50)野生流感H1N1亚型病毒的保护。结论通用流感疫苗候选疫苗Comb-mRNA能够诱导小鼠免疫反应并保护小鼠免受病毒感染。
田昱莹邓卓雅李聪孙芳曹蕊杨鹏辉
关键词:流感疫苗血凝素核蛋白
新型肠炎沙门菌菌影候选疫苗在小鼠免疫应答和保护功效的评估
2024年
目的比较肠炎沙门菌制备的菌影(SE-ghost)通过肌肉注射(肌注)和口服不同免疫途径接种雌性BALB/c小鼠诱导体液和细胞免疫应答的功效。方法用SE-ghost接种BALB/c小鼠,间接ELISA检测小鼠血清中IgG抗体水平和阴道灌洗液IgA抗体水平;流式细胞仪检测小鼠脾脏CD3^(+)CD4^(+)T、CD3^(+)CD8^(+)T细胞百分比变化和脾脏内细胞因子IL-4、IFN-γ分泌;三次免疫后所有小鼠口服半数致死量肠炎沙门菌进行强毒攻击。用SE-ghost刺激小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDCs),流式细胞仪检测表面分子抗体APC-CD11c、FITC-MHC ClassⅡ、PE-CD40、FITC-CD86、PE-CD80表达量;双抗体夹心ELISA测定BMDCs上清液IL-1β、IL-6、IL-10和IL-12p70的产量。结果与PBS组相比,SE-ghost(口服)和SE-ghost(肌注)免疫组小鼠体内肠炎沙门菌特异性抗体IgG和IgA水平明显增高;脾脏CD3^(+)CD4^(+)T细胞百分比上调、高分泌细胞因子IL-4、IFN-γ。肌肉注射SE-ghost比口服可诱导更强的体液和细胞免疫应答。致病菌肠炎沙门菌强毒攻击后,SE-ghost(口服)和SE-ghost(肌注)免疫组生存率高达80%。与对照组相比,BMDCs经SE-ghost刺激后高表达表面成熟分子抗体CD86、CD80、CD40、MHCⅡ,高分泌细胞因子IL-1β、IL-6、IL-10、IL-12p70。结论通过肌肉注射SE-ghost进行免疫,可在小鼠中引发更强大的抗原特异性免疫应答,以防止沙门菌感染。SE-ghost是一种有用的沙门菌候选疫苗
杨慧韩雪杜小春焦红梅郑国军
关键词:肠炎沙门菌灭活疫苗免疫应答
新型冠状病毒多表位亚单位候选疫苗的制备及其免疫特性评价
新型冠状病毒肺炎(COVID-19)自2019年年底爆发,在全世界范围内造成了严重影响。新型冠状病毒(SARS-CoV-2)不仅可致人死亡,也给社会带来持续的恐慌,造成了严重的经济损失。大范围疫情虽然已经消退,但病毒仍在...
张鹏飞
关键词:新型冠状病毒结构蛋白表位疫苗
基于羊肚菌和乳酸菌菌株的口服型新冠候选疫苗的制备方法及应用
本发明公开了一种基于羊肚菌和乳酸菌菌株的口服型新冠候选疫苗的制备方法,羊肚菌工程菌株的构建:构建能够异源表达新型冠状病毒刺突蛋白S1亚基和卷曲乳酸杆菌S层蛋白细胞壁结合结构域融合蛋白的羊肚菌工程菌株;羊肚菌工程菌株总蛋白...
霍文严李峻志贺雪莲祁鹏戴璐张黎光路鹏鹏刘愚乔婷李安利
绵羊源荚膜血清D型多杀性巴氏杆菌的生物学特性及2种候选疫苗的免疫效果评价被引量:1
2024年
旨在研究新疆绵羊源荚膜血清D型多杀性巴氏杆菌(PmD)的生物学特性,探索其灭活疫苗与OmpH重组疫苗对小鼠的免疫保护效果,为防控新疆地区绵羊巴氏杆菌病提供参考。采用细菌分离鉴定、PCR鉴定、药敏试验、耐药与毒力基因检测、致病性试验等方法初步明确PmD的生物学特性;并通过最佳灭活条件和佐剂筛选、安全性试验、原核表达等方法制备PmD灭活疫苗与PmD-OmpH重组疫苗,采取小鼠攻毒保护试验评价2种疫苗的免疫效力。结果:从绵羊肺脏中分离出1株PmD,药敏试验显示,该菌为7重耐药菌,未检测到耐药基因;毒力基因检测显示,该菌具有12种毒力基因(exbB、exbD、hgbA、tonB、fimA、Oma87、OmpH、Psl、sodA、sodC、tbpA、toxA);致病性较强,对小鼠的最小致死菌量为2.2×105 CFU;灭活疫苗和重组疫苗对相同血清型菌株攻毒的保护率分别为80%和10%;灭活疫苗对血清型A、F和未知菌株攻毒保护率分别为0、20%和0,而重组疫苗的保护率则全为0。本研究发现1株强耐药、强毒力的绵羊源PmD,灭活疫苗对同种血清型菌株的保护性远高于重组疫苗,发病地区羊场可采用同种血清型灭活疫苗进行预防和控制绵羊巴氏杆菌病,对多价疫苗和新型疫苗的研制还有待进一步发掘。
汪阳张凌金映红金映红薛晶汪萍李晓卓薛晶刘文锴韩翔舒夏俊
关键词:绵羊多杀性巴氏杆菌生物学特性
猴痘病毒四抗原mRNA候选疫苗的筛选与评价
2022年5月以来,曾经只在非洲部分地区流行的猴痘(Mpox)疫情在全球范围内快速蔓延并形成突发紧急公共卫生事件。猴痘是由猴痘病毒(Monkeypox virus,MPXV)感染所致的人畜共患病毒性疾病,猴痘病毒与天花病...
张震
关键词:MRNA疫苗猴痘病毒
呼吸道合胞病毒mRNA候选疫苗的表达、鉴定及免疫效果验证
2024年
目的制备呼吸道合胞病毒F蛋白的融合前构象(pre-F)mRNA疫苗,进行可行性验证。方法对抗原基因进行密码子优化设计,分别连接至pGEM-3Zf-N3载体上,通过质粒线性化、体外转录、纯化和Cap1加帽处理,得到功能性mRNAs。在转染至293T细胞后,利用Western blot和间接免疫荧光试(IFA)来确定目标蛋白的表达情况。通过微流控装置制备LNP/mRNAs疫苗免疫C57BL/6小鼠,检测小鼠血清中抗原特异性IgG抗体效价,评估免疫效果。结果成功构建重组质粒Pre-F-GCN4t和mDS-Cav1,通过双酶切验证条带符合预期大小。表达目的抗原大小为57.57 ku和64.35 ku。成功检测小鼠血清中抗原特异性IgG抗体,Pre-F-GCN4t免疫组的效果优于mDS-Cav1组,3次免疫较2次免疫提升了2倍,抗体效价最高可达1∶4×10^(4)。结论两种抗原设计模式均具有可行性,Pre-F-GCN4t的设计方式对于激活机体的体液免疫应答更有优势,mRNA疫苗无需体内转录,为呼吸道合胞病毒mRNA疫苗的优化设计提供理论基础。
姜人月庄忻雨田明尧唐家凤狄亚心杨松惠许智强于潼张桐金鑫金宁一
关键词:呼吸道合胞病毒密码子优化体液免疫
猴痘自组装纳米颗粒候选疫苗的制备及免疫应答特征研究
2024年
目的 本研究旨在制备自组装纳米颗粒猴痘候选疫苗并研究其免疫应答特征,为其疫苗设计提供可参考的试验数据。方法 利用原核系统表达纯化抗原蛋白A29L-SpyTag和骨架蛋白Mi3-SpyCatcher,化学组装制备纳米颗粒A29L-Mi3,皮下免疫小鼠,通过ELISA测定抗体效价、空斑试验测定抗体中和、流式细胞术测定淋巴细胞分泌细胞因子情况,并描述其免疫应答特征。结果 成功制备A29L-Mi3纳米颗粒,颗粒呈中空笼状均匀分布,其粒径平均为(29±0.19) nm。A29L-Mi3纳米颗粒候选疫苗联合SP01佐剂后,中和抗体效价强于A29L蛋白候选疫苗,且A29L-Mi3纳米颗粒候选疫苗免疫2次即能够获得免疫3次相近滴度的中和抗体。A29L-Mi3纳米颗粒候选疫苗激活的小鼠T淋巴细胞免疫应答水平高于A29L蛋白候选疫苗。结论 成功体外组装制备出结构均一的A29L-Mi3蛋白纳米颗粒,具有较强的免疫原性,联合SP01佐剂后中和能力提高,为免疫程序的优化提供参考数据。细胞免疫应答水平均高于单独的A29L蛋白,为猴痘疫苗的设计与研发提供借鉴。
谭凌云王慧杨晓岚汪芳洲李燕罗德炎谷宏婧
关键词:体液免疫细胞免疫
一株马立克病病毒特超强变异株meq基因编辑缺失候选疫苗毒株的构建与鉴定
2024年
马立克病(MD)是由马立克病病毒(MDV)感染引起的一种重要的家禽免疫抑制病与肿瘤病,该病可用疫苗进行预防和控制,但在长期免疫压力下MDV的毒力持续增强,经典MD疫苗已难以对当前流行的特超强MDV(HV-MDV)变异株提供良好的免疫保护,亟需研发新一代MD高效疫苗。本文以HV-MDV变异株HNSQ01为亲本毒株,在CEF上连续传代之后,利用CRISPR/Cas9系统对其meq基因进行编辑,通过一系列试验鉴定和分析,最终建立一株meq基因编辑缺失的MD疫苗候选毒株,命名为SQ01Δmeq。1日龄SPF鸡攻毒试验结果显示,在77 d试验周期内,亲本毒株HNSQ01不仅严重抑制感染鸡生长并导致免疫抑制,而且导致100%的MD发病率、100%致死率及80%的肉眼观察肿瘤发生率;但SQ01Δmeq未引起感染鸡的生长及免疫抑制,而且MD发病率、致死率及肿瘤发生率均为0%,表明其对宿主无致病性,生物安全性良好。本研究建立的meq基因编辑缺失MDV毒株SQ01Δmeq,为后续研发新型高效的MD疫苗奠定了重要基础。
张多滕蔓张卓刘金玲郑鹿平各思雨韩放罗琴柴书军柴书军余祖华赵东
关键词:马立克病MDVMEQ新型疫苗

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郑海学
作品数:596被引量:459H指数:10
供职机构:中国农业科学院兰州兽医研究所
研究主题:非洲猪瘟病毒 口蹄疫病毒 蛋白 口蹄疫 病毒
田宏
作品数:379被引量:430H指数:10
供职机构:中国农业科学院兰州兽医研究所
研究主题:非洲猪瘟病毒 试剂盒 口蹄疫病毒 疫苗 猪瘟
刘华南
作品数:155被引量:22H指数:3
供职机构:中国农业科学院兰州兽医研究所
研究主题:多肽 机体 抗原特异性免疫应答 亚单位疫苗 非洲猪瘟病毒
李丹
作品数:170被引量:21H指数:2
供职机构:中国农业科学院兰州兽医研究所
研究主题:非洲猪瘟病毒 口蹄疫病毒 亚单位疫苗 蛋白 疫苗
刘湘涛
作品数:700被引量:1,379H指数:17
供职机构:中国农业科学院兰州兽医研究所
研究主题:口蹄疫病毒 口蹄疫 非洲猪瘟病毒 猪瘟病毒 多肽