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miR-31调控人角膜缘干细胞自我更新和分化的机制研究: 2017年; 目的探讨microRNA-31(miR-31)对在胚胎干细胞微环境中培养的角膜缘干细胞(LSCs)自我更新与分化的调控作用。方法采用CnT-20,添加20%胚胎干细胞培养上清液(ESC-CM),对LSCs进行培养。将ESC-CM组细胞进行转染miR-31或者Antago-31,检测细胞克隆形成能力的改变;流式细胞仪分析细胞周期、凋亡的改变,qPCR检测FIH-1、P21、P63、ABCG2、CK3、miR-31、miR-143、miR-145、miR-184的表达情况;免疫荧光与Western blot检测CK3、Cx43 P63、ABCG2、Survivin、FIH-1、P21、Caspase-3等的表达情况。结果 miR-31 mimic组细胞的CFE明显低于miR-31 inhibitor组[(3.00±1.00)%vs.(6.90±0.79%),P<0.05];Antago-31组细胞的CFE[(8.90±0.53)%vs.(7.27±0.80),P<0.05]则显著高于Ir-antago组。miR-31mimic组进入S期细胞的比例[(9.33±2.88)%vs.(16.00±1.73)%,P<0.05]明显低于miR-31 inhibitor组;Antago-31组进入S期细胞的比例[(22.33±2.58)%vs.(15.33±0.58)%,P<0.05]则显著高于Ir-antago组。miR-31mimic组细胞凋亡的比例[(31.13±7.56)%vs.(4.83±0.38%),P<0.05]明显高于miR-31 inhibitor组;Antago-31组细胞凋亡的比例[(3.03±0.23)%vs.(5.93±1.53%),P<0.05]则显著低于Ir-antago组。在进行miR-31mimc处理之后,P63、ABCG2、Survivin、FIH-1、miR-143、miR-145的表达量下降,而P21、Cx-43、CK3、miR-31、miR-184的表达量明显上升(P<0.05)。在antago-31处理组,P63、ABCG2、Survivin、FIH-1、miR-143、miR-145的表达量上升,而P21、Cx-43、CK3、miR-31、miR-184的表达量明显下降(P<0.05)。Caspase-3的表达水平在antago-31处理组一直维持在相对较低的水平。结论通过转染Antago-31提高了FIH-1在LSCs中的表达水平,并减少了P21的表达。miR-31表达水平的下调促进了LSCs干性的维持。ESC-CM通过抑制miR-31/FIH-1/P21部分调控了LSCs的更新与分化。; 刘志平沙翔垠曾敏智邹湖涌曾婧吴君舒; 关键词：人角膜缘干细胞 MICRORNAS 胚胎干细胞微环境

人角膜缘干细胞提取方法的比较性研究被引量：1: 2015年; 目的：比较组织块培养法、酶消化法及平板离心法获取角膜缘干细胞的不同。方法：取得人组织，分别应用组织块培养法、酶消化法及平板离心法获得角膜缘细胞并进行原代细胞培养，对获得的细胞通过免疫组化方法研究其p63、ABCG2及K3表达情况，以比较上述3种方法的不同之处。结果：3种方法均可获取大量阳性表达p63、ABCG2及阴性表达K3的细胞，符合角膜缘干细胞特点，但其中组织块培养法中阴性表达p63的细胞略多，并偶见阳性表达K3的细胞；另外，在提取细胞的实验操作方面，组织块培养法耗时约7天，酶消化法耗时约1天，平板离心法耗时约2天；在获得细胞量方面，1枚人角膜缘材料酶消化法可获得的细胞数量在此3种方法中通常最少。结论：平板离心法在目前常用的人角膜缘干细胞提取方法中可能是最具优越性的。; 齐飞于佳欣李若溪; 关键词：角膜缘干细胞组织块培养法酶消化法

胚胎干细胞微环境增强人角膜缘干细胞的干性和抑制凋亡的机制被引量：3: 2015年; 背景成体干细胞的命运与其生存的微环境密切相关.研究表明,胚胎干细胞（ESCs）微环境能增强人角膜缘干细胞（LSCs）的干性,其作用机制是研究热点. 目的探讨干细胞微环境增强LSCs的干性及其抑制细胞凋亡的分子机制.方法将129小鼠ES细胞株（E14细胞）分别用CnT-20培养液和CnT-20＋体积分数20％ ES（ESC-CM）培养液进行培养和传代.采用新鲜供体人角膜缘组织块培养法,分别用CnT-20培养液和ESC-CM培养液培养和传代LSCs,细胞经固定后于光学显微镜下观察细胞克隆形态并计算克隆形成率（CFE）.ESC-CM培养组细胞分别转染端粒酶逆转录酶（TERT） siRNA（19-25nt siRNA）或siRNA（sc37007）,流式细胞仪检测转染前后细胞凋亡、线粒体膜电位的改变;采用免疫荧光技术和流式细胞技术检测siRNA转染前后细胞中端粒酶的表达和活性氧簇（ROS）的产生情况;采用RT-PCR、免疫荧光技术和Western blot法检测细胞中干细胞标志物p63、三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2（ABCG2）、整合素β1（integrin β1）和细胞分化标志物细胞角蛋白3（CK3） mRNA及其蛋白的表达;采用Western blot法检测细胞中黏着斑激酶（FAK）、Akt和糖原合成酶激酶3β（GSK3β）及其磷酸化蛋白以及p21蛋白的改变. 结果 ESC-CM培养组LSCs可传至第8代,CFE为（7.6±0.6）％,CnT-20培养组传至第6代,CFE为（5.6±0.6）％,差异有统计学意义（t=4.454,P=0.011）;ESC-CM培养组第2、3、4、5、6代LSCs的凋亡百分比均明显低于CnT-20培养组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）;siRNA-F转染细胞的凋亡率为（7.7±1.3）％,明显低于siRNA-TERT转染细胞的（32.3±3.1）％,差异有统计学意义（t=-12.588,P=0.000）.ESC-CM培养组与CnT-20培养组的原代LSCs 中干细胞标志物mRNA及其蛋白、TERT蛋白的相对表达量差异均无统计学意义（均P＞0.05）,但ESC-CM培养组CK3 mRNA及其蛋白的相对表达量�; 刘志平沙翔垠王智崇李朝阳刘颖周瑾; 关键词：胚胎干细胞端粒酶角膜缘干细胞凋亡

一种培养人角膜缘干细胞植片的方法: 本发明属组织工程学领域，涉及一种以生物羊膜为载体培养人角膜缘干细胞植片的方法。本发明采用生物羊膜作为载体培养角膜缘干细胞；所述的生物羊膜为经钴-60辐照灭菌消毒的冷冻干燥人羊膜，安全性高于去上皮羊膜，且易于保存、方便获取...; 刘焰黄洁; 文献传递

人角膜缘干细胞保存和结膜杯状细胞诱导分化的初步研究: 本研究分为二部分：　　第一部分：结膜杯状细胞的诱导分化　　目的：　　体外分离培养人结膜杯状细胞，观察其形态结构并对其性质进行鉴定;观察正常人角膜缘组织与结膜上皮组织在羊膜上培养的区别;探讨γ-分泌酶抑制剂对体...; 田乐; 关键词：角膜缘干细胞组织块法杯状细胞

人角膜缘干细胞的体外培养及鉴定被引量：3: 2010年; 目的探讨人自体角膜缘干细胞(LSCs)体外培养及鉴定的方法。方法将供体新鲜人角膜缘组织在制备的含20%胎牛血清DMEM/F12培养基的羊膜载体上应用组织块培养法进行体外培养,对培养获得的LSCs用苏木精-伊红染色在倒置显微镜下进行形态学观察,用免疫荧光技术鉴定培养的LSCs细胞。结果组织块静置2h后贴壁良好,3～4d细胞从组织块边缘萌出,7～10d细胞出现生长高峰,12～14d形成良好的细胞单层。细胞形态呈多边形、圆形、卵圆形和梭形。第14天时行间接免疫荧光染色,可见大量细胞表达p63,呈细胞质的绿色荧光;少量细胞表达AE5,呈细胞质的绿色荧光和细胞核的红色荧光。结论组织块培养法体外培养的人LSCs具有与正常人LSCs相一致的生物学特性。; 魏彤心李冰史静华; 关键词：角膜缘干细胞羊膜体外培养

胚胎干细胞条件培养液促进人角膜缘干细胞干性维持的实验研究: 本研究旨在本课题组前期研究基础上在无血清无饲养层培养条件下添加一定含量ES细胞培养上清液作为条件培养液（ESC-CM），进行小组织块HLCEC体外培养，探讨该体系对人角膜缘干细胞生物学特性（形态、细胞表型）和功能（增殖，...; 周瑾; 文献传递

人角膜缘干细胞原代培养的研究: 目的：探讨人角膜缘干细胞的培养、鉴定方法。以及人角膜缘干细胞的形态学观察，为临床上应用角膜缘干细胞进行相关治疗奠定基础。方法：取我院眼科2007年手术病人的角膜缘组织。按组织块所取的大小，将其分为两组：其中，...; 贺庆强; 关键词：角膜缘干细胞细胞培养组织块培养法单克隆抗体; 文献传递

pEGFP-bFGF基因转染人角膜缘干细胞的实验研究被引量：1: 2009年; 本研究体外培养并用抗角质蛋白K3/K12鼠单抗(AE5)鉴定人角膜缘干细胞(HLSCs),采用脂质体转染法将pEGFP-bFGF基因转染培养的HLSCs,48 h后荧光显微镜下可见特异性的绿色荧光,基因转染率为20%～30%,同时制作NaOH细胞损伤模型,研究转染后的细胞对损伤的抵抗作用,转染后损伤的细胞存活状况高于未转染损伤组(P<0.05),而细胞凋亡及坏死率明显低于未转染损伤组(P<0.05)。pEGFP-bFGF基因能够转染培养的HLSCs,其表达产物对碱损伤的HLSCs具有保护作用,初步探讨了基因工程联合组织工程技术治疗眼表疾病的可行性。; 夏凉赵敏徐梅; 关键词：碱性成纤维细胞生长因子人角膜缘干细胞基因转染

以保留和去除上皮的羊膜为载体培养人角膜缘干细胞生物学特性的研究: 目的：角膜上皮细胞功能和结构的完整对保持角膜透明性起着至关重要的作用。角膜上皮细胞具有自我更新的能力，这是由位于角膜缘的干细胞(stem cells，SCs)增殖分化而来的，当角膜缘干细胞部分或全部损伤时，其对角膜上皮的...; 刘蕾; 关键词：角膜缘干细胞生物学特性角膜上皮细胞; 文献传递

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