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犹素化修饰调控人端粒酶催化亚基hTERT的机制及功能研究: 端粒酶主要是由催化亚基(TERT)和模板RNA(TERC)组成的合成端粒DNA的逆转录酶。端粒酶通过维持端粒长度保护基因组的完整性,与衰老、衰老相关疾病包括肿瘤密切相关。hTERT的转录调控及翻译后修饰是决定端粒酶活性的...; 金雅琪; 关键词：端粒酶 HTERT 翻译后修饰降解

人端粒酶催化亚基反义RNA重组腺病毒载体的构建与鉴定被引量：1: 2012年; 背景:人端粒酶催化亚基与c-myc在喉鳞状细胞癌中有密切的相关性。目的:构建含有c-myc启动子的人端粒酶催化亚基的重组腺病毒载体,观察人端粒酶催化亚基在细胞中表达后对细胞增长的影响。方法:按照人工合成中反向转录的方法设计基因合成引物,用复式PCR获得目的片段ashTERT(322bp)。将片段ashTERT克隆到pUC57(2.7kb)克隆载体,然后热激转化到E.coli感受态细胞中,菌检、PCR、鉴定阳性克隆后,菌液放大培养,提取质粒pUC57-ashTERT,然后对质粒进行测序。将目的基因片段亚克隆到穿梭载体pshuttle-CMVneo上,然后构建重组腺病毒质粒pAd-ashTERT。转入293细胞中进行病毒包装、鉴定和滴度测定。结果与结论:提取质粒pUC57-ashTERT,测序符合序列要求。质粒pUC57-ashTERT转入293细胞后,成功构建了有较强感染能力的含人端粒酶催化亚基基因的重组腺病毒载体。; 彭智贾振华唐红伟黄海华郭晓瑞韦有万王香梅张培华; 关键词：人端粒酶催化亚基瘢痕疙瘩成纤维细胞腺病毒

人端粒酶催化亚基和SV40大T抗原永生化猪脐静脉血管内皮细胞被引量：5: 2012年; 为建立稳定的猪血管内皮细胞系,用于猪瘟病毒(CSFV)的致病机理研究提供理想的细胞模型,本研究利用逆转录病毒分别转导人端粒酶催化亚基(hTERT)基因或SV40大T抗原(SV40 LT)基因进入猪脐静脉血管内皮细胞(SUVEC),通过G418或嘌呤霉素筛选阳性克隆,并进行细胞传代研究和细胞形态学及表型鉴定。分别获得了两种方法建立的永生化猪血管内皮细胞系SUVEC-hT和SUVEC-ST。两种细胞系均呈铺路石样单层排列生长,具有高度的增殖活性,在传代70代后不表现任何衰老细胞的特征,并保持接触生长抑制。SUVEC-hT细胞系持续表达hTERT、CD31、CD34和von Willebrand factor,并能摄取Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白(Dil-Ac-LDL)。SUVEC-ST细胞系持续表达SV40 LT、CD31和CD34,并能摄取Dil-Ac-LDL。两个细胞系均保持正常的核型并对CSFV敏感。结果表明通过表达外源的hTERT或SV40 LT,SUVEC已被永生化,并且保留了血管内皮细胞的主要生物学特征。; 张思春余乐李素涂长春; 关键词：猪血管内皮细胞人端粒酶催化亚基 SV40 LT 永生化

人端粒酶催化亚基和SV40大T抗原介导的猪血管内皮细胞永生化研究: 血管内皮细胞（EC）指血管内表面形成的单层扁平细胞，它们在多种生理过程中发挥着重要的作用。猪的血管内皮细胞是猪瘟病毒（CSFV）的主要靶细胞，其感染CFSV后可引起严重的广泛性出血，是导致病猪死亡的主要原因之一。因此EC...; 张思春; 关键词：血管内皮细胞人端粒酶催化亚基永生化

人端粒酶催化亚基和SV4O大T抗原永生化猪脐静脉血管内皮细胞: 为了建立稳定的猪血管内皮细胞系，为猪瘟病毒(CSFV)的致病机理研究提供理想的细胞模型，本研究利用逆转录病毒分别转导人端粒酶催化亚基(hTERT)基因或SV40大T抗原(SV40 LT)基因进入猪脐静脉血管内皮细胞，G4...; 张思春余乐李素涂长春; 关键词：猪瘟病毒脐静脉血管内皮细胞人端粒酶催化亚基抗原基因

人端粒酶催化亚基和SV4O大T抗原永生化猪脐静脉血管内皮细胞: 为了建立稳定的猪血管内皮细胞系，为猪瘟病毒(CSFV)的致病机理研究提供理想的细胞模型，本研究利用逆转录病毒分别转导人端粒酶催化亚基(HTERT)基因或SV40大T抗原(SV40 LT)基因进入猪脐静脉血管内皮细胞，G4...; 关键词：猪血管内皮细胞人端粒酶催化亚基永生化

联合干扰人端粒酶催化亚基对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响: 2011年; 目的探讨基因的联合干扰对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响。方法将转染细胞分为共四组:psi-control对照组(A组)、psi-端粒酶催化亚基(hTERT)1组(B组)、psi-hTERT1和psi-hTERT2共转染组(C组)、psi-hTERT1和psi-端粒酶调节相关蛋白(TRAP)1共转染组(D组)。采用RT-PCR及Western blot分别检测hTERT mRNA和蛋白表达,端粒重复序列扩增-PCR法检测端粒酶活性,MTT法检测SGC-7901细胞增殖。结果与A组相比,B组、C组hTERT mRNA和蛋白表达、端粒酶活性降低(P<0.05),细胞增殖减慢,细胞凋亡增加;而D组各指标与A组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论联合干扰的效果可能与剂量和目的基因有关。; 江国昌钱晓彬成静; 关键词：人端粒酶催化亚基 RNA干扰

利用重组腺病毒介导人端粒酶催化亚基（hTERT）制备牛乳腺细胞体外模型的研究: 乳腺上皮细胞是制作乳腺生物反应器并且评估乳腺特异性表达载体功能的靶细胞。由于乳腺细胞体外培养较为困难,到目前为止,能够用于乳腺特异表达载体功能检测的细胞系并不多见。此外,大量研究表明许多细胞系存在细胞异质性、基因变异等异...; 贺小英; 关键词：牛乳腺上皮细胞人端粒酶催化亚基腺病毒乳腺生物反应器

人端粒酶催化亚基(hTERT)实时荧光定量PCR标准品的构建: 2010年; 目的:构建用于检测人端粒酶催化亚基(hTERT)实时荧光定量PCR标准品。方法:通过逆转录PCR扩增得到目的片段后连接至pMD18-T载体,转化DH5α感受态细胞。分别经PCR和测序验证重组质粒的正确性。分光光度计测量重组质粒的吸光值,换算成拷贝数浓度后作梯度稀释制得质粒标准品。10倍梯度稀释质粒标准品后进行实时荧光定量PCR分析。结果:人端粒酶催化亚基(hTERT)基因片段成功克隆至pMD18-T载体之中,重组质粒序列完全正确。实时荧光定量PCR分析10倍梯度稀释的质粒标准品所得标准曲线良好。结论:成功构建了人端粒酶催化亚基(hTERT)实时荧光定量PCR标准品。; 王有为韩之波康健孟磊韩忠朝; 关键词：端粒酶逆转录酶逆转录多聚酶链式反应多聚酶链式反应

人端粒酶催化亚基肿瘤相关性研究被引量：1: 2009年; 人端粒酶催化亚基（hTERT）基因转录的从头激活是端粒酶活化的主要限速步骤，受到多种癌基因或抑癌基因产物的精密调控。构建hTERT启动子调控抗肿瘤基因的逆转录病毒载体，使抗肿瘤基因在端粒酶阳性的肿瘤细胞内定向表达，有望用于肿瘤基因治疗。; 贾振华唐红伟彭智梁杰; 关键词：端粒酶人端粒酶催化亚基肿瘤基因治疗

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