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一种重组冠状病毒NL63基因组、引物组、重组载体、重组菌株、重组冠状病毒NL63的制备方法及其应用
本发明属于重组病毒及生物医药技术领域,具体涉及一种重组冠状病毒NL63基因组、引物组、重组载体、重组菌株、重组冠状病毒NL63的制备方法及其应用。本发明针对冠状病毒NL63的基因组的ORF3编码区域进行改造,采用部...
谭文杰黄保英王梦微叶飞
清热化湿抗毒方对229E型冠状病毒的体外抑制作用研究
2024年
目的 研究清热化湿抗毒方对229E型冠状病毒(HCoV-229E)的体外抑制作用。方法 采用体外MRC-5及HuH-7细胞模型分析清热化湿抗毒方的药物毒性及抗HCoV-229E的体外药效,通过空斑实验验证其对HCoV-229E的抑制作用。设置预防给药组、感染期给药组和清热化湿抗毒方高、中、低剂量组,采用实时荧光定量PCR法检测清热化湿抗毒方对病毒RNA表达的抑制作用;免疫荧光法检测病毒结构蛋白的表达;并对各组病毒上清液的半数组织感染量(TCID50)、核酸拷贝数、炎症因子水平进行检测。结果 清热化湿抗毒方对MRC-5和HuH7细胞的半数毒性浓度(TC50)分别为8.481、 7.793 mg/mL,对HCoV-229E的半数抑制浓度(IC50)分别为0.798、 1.101 mg/mL,治疗指数分为10.628、 7.078;且对MRC-5感染HCoV-229E后病毒空斑的形成具有抑制作用。在RNA和蛋白表达方面,清热化湿抗毒方各剂量组可不同程度地抑制细胞内HCoV-229E的复制。而在病毒上清液中,清热化湿抗毒方可降低活病毒载量、核酸拷贝数及炎症因子IL-6水平。结论 清热化湿抗毒方具有较好的体外抗HCoV-229E药物活性,其抗病毒机制可能与差异调控miRNA直接靶向病毒RNA或宿主炎症应答基因发挥抑制作用有关。
余亦程徐铁龙吴煜佳李龙雪周显凤朱亚婷林子琦刘良徛
关键词:人胚肺细胞人肝癌细胞体外抗病毒
一种冠状病毒HCoV-OC43的MNP标记位点、引物组合物、试剂盒及其应用
本发明公开了一种冠状病毒HCoV‑OC43的MNP标记位点、引物组合物、试剂盒及其应用,所述MNP标记位点包括参考基因组NC_006213.1的15个标记,所述引物核苷酸序列如SEQ ID NO.1~SEQ ID NO...
李甜甜方治伟高利芬陈利红肖华锋万人静李论周俊飞彭海
散寒化湿颗粒对冠状病毒229E和OC43感染致小鼠肺炎的作用机制研究
2024年
目的考察散寒化湿颗粒对冠状病毒229E毒株和OC43毒株感染小鼠致肺炎模型的作用机制。方法根据不同毒株将实验分批进行,每批实验动物按体重随机分成7组:正常组、病毒感染组、磷酸氯喹片组、连花清瘟颗粒组、散寒化湿颗粒(给药组)3个剂量组,高剂量为11 g·kg^(-1)·d^(-1)(相当于生药52.8 g·kg^(-1)·d^(-1))、中剂量为5.5 g·kg^(-1)·d^(-1)(相当于生药26.4 g·kg^(-1)·d^(-1))、低剂量为2.75 g·kg^(-1)·d^(-1)(相当于生药13.2 g·kg^(-1)·d^(-1))。使用冠状病毒229E和OC43感染小鼠,建立肺炎模型。通过检测肺指数和肺部病理变化等指标评价散寒化湿颗粒对冠状病毒肺炎小鼠的药理作用。结果散寒化湿颗粒在高、中、低3个剂量组均能有效降低小鼠的肺指数,并减轻肺组织的病理损伤。结论散寒化湿颗粒对冠状病毒229E毒株和OC43感染致小鼠肺炎均具有治疗作用。
张敬升高双荣庞博刘莉娜徐英莉曹姗陈梦苹张宇赵荣华崔晓兰
关键词:小鼠肺指数病理变化
冠状病毒用组合物
本发明的课题在于,提供能够预防冠状病毒感染、其感染所致的发病、起因于其感染的症状的加重的非药物类的抗冠状病毒用组合物。本发明的抗冠状病毒用组合物以由乳杆菌属乳酸菌生成的胞外多糖为有效成分。需要说明的是,在此,乳杆菌...
唐舒宜 石井祥子 小川美穗
冠状病毒OC43感染性克隆的构建
2024年
目的:构建携带绿色荧光报告基因的冠状病毒OC43感染性克隆。方法:设计带有绿色荧光蛋白的冠状病毒OC43感染性克隆基因组序列,分段合成后利用融合聚合酶链式反应等方法得到8个亚基因组片段,通过酵母转化关联重组技术获得重组质粒,转染HEK-293T细胞进行病毒拯救,收获转染细胞培养上清感染靶细胞分析病毒拯救情况。结果:获得冠状病毒OC43感染性克隆重组质粒,将该质粒转染细胞后成功获得携带绿色荧光蛋白报告基因的冠状病毒OC43重组病毒。结论:成功构建了冠状病毒OC43感染性克隆并获得重组病毒,为针对冠状病毒的基础和应用研究提供了有效工具。
唐晴王蓓朱英霞杜作苑雷晓波黄鹤
关键词:感染性克隆反向遗传学
百里香药茶对冠状病毒OC43体内外增殖的影响
2024年
目的:探究百里香药茶(BLX)对冠状病毒OC43(HCoV-OC43)的体内外抗病毒活性及作用机制。方法:通过超高效液相色谱-质谱(UPLC-MS)分析BLX化学成分,利用HCoV-OC43细胞模型检测BLX的体外毒性及其对该病毒的抑制作用,采用时间差异给药法检测药物作用阶段,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法检测病毒基因拷贝数,利用HCoV-OC43小鼠模型检测BLX的体内毒性及其对小鼠体质量和生存周期变化的影响,通过免疫组化技术检测脑和肺组织中病毒蛋白表达。结果:从BLX中鉴定出11种化合物;在HCoV-OC43感染的HRT-18细胞中,BLX的半数毒性浓度(CC50)为(13859.56±319)mg·L^(-1),半数抑制浓度(IC50)为(1439.09±200)mg·L^(-1),其选择指数范围为8.26~11.44。与病毒组比较,BLX在1500、1000、500 mg·L^(-1)剂量下均可明显抑制病毒复制(P<0.05,P<0.01),该药物在病毒复制早期即可发挥抗病毒作用,且对病毒吸附过程的干扰大于对病毒入胞过程的干扰(P<0.05)。在HCoV-OC43感染的小鼠模型中,BLX在1200、600 mg·kg^(-1)·d^(-1)剂量下可缓解被感染小鼠的症状、延长生存期并降低死亡率,有效抑制脑组织中(P<0.01)和肺组织(P<0.01)中病毒核衣壳mRNA表达水平;BLX在1200mg·kg^(-1)剂量下可抑制脑组织(P<0.01)和肺组织(P<0.01)中病毒核衣壳蛋白的表达。结论:BLX含有多种具有抗病毒活性的化学成分,可在体内外抑制HCoV-OC43复制,该药物可能通过干扰病毒吸附等方式发挥其抗病毒活性。该研究为冠状病毒感染治疗提供了候选药物,为BLX的进一步开发应用提供了理论参考。
田纪祥张彤彤常雨宁谢佩芳董书维赵晓昂王云赵春晖吴宏伟张阿梅李海舟夏雪山张华敏
关键词:抗病毒活性细胞模型
冠状病毒HCoV-229E在无生命物体表面存活时间比较研究
2024年
目的比较冠状病毒HCoV-229E在不同的无生命载体上的存活时间,为做好冠状病毒消毒提供依据。方法试验环境温度为(25±1)℃,相对湿度为55%±10%,采用细胞接种法检测病毒存活,病毒悬液滴度达到国家标准要求,进行不同物体表面上HCoV-229E的存活试验。结果纸片、布片载体上病毒滴度下降较快,滴染纸片、布片72 h后,病毒滴度接近0;塑料片载体上病毒滴度下降较慢,放置5 d病毒滴度为0.75 logTCID_(50)/0.1 mL;不锈钢载体、玻璃片载体上病毒滴度下降较慢,放置4 d后,病毒滴度分别为1.0和0.75 logTCID_(50)/0.1 mL。5 d以后所有载体上均未检测到活病毒。结论HCoV-229E在不同无生命物体表面上存活时间不同,在实际消毒工作中应有针对性地开展物体表面和环境消毒,提高消毒工作效能。
刘冷邓惠陈惠珍郑小凌王冰姝王雅静黄旭和张磊纪迅敏钟昱文
关键词:人冠状病毒存活时间
伏湿小鼠感染冠状病毒HCov-229E后免疫功能状态变化
2024年
目的 通过伏湿小鼠模型感染冠状病毒HCov-229E,探索伏湿状态下病毒感染机体免疫功能的改变。方法 将24只BALB/c小鼠按随机数字表法分为正常组、伏湿组、感染组、伏湿感染组,每组6只;伏湿组和伏湿感染组构建伏湿小鼠模型,感染组和伏湿感染组造模第22天给予10^(-4)HCoV-229E半数组织培养感染剂量(TCID_(50))滴鼻,正常组和伏湿组以磷酸盐缓冲液(PBS)代替。观察肺组织病理;测量脾指数、胸腺指数;检测外周血白细胞(WBC)、淋巴细胞(Lym)、单核细胞(Mono)、中性粒细胞(NE)、红细胞分布宽度变异系数(RDW-CV)、红细胞分布宽度标准差(RDW-SD);Luminex液相芯片法观察血清中趋化因子配体5(CCL5/RANTES)、巨噬细胞炎症蛋白1β(MIP-1β)、干扰素诱导蛋白10 (IP-10)炎症因子在蛋白水平的表达;免疫组化检测肺组织CD4^(+)、CD8^(+)的表达;流式细胞术检测肺CD4+、CD8+T细胞、自然杀伤(NK)细胞的表达。结果 正常组以及伏湿组小鼠肺组织肺泡结构完整,腔内无明显渗出;感染组小鼠肺间质、肺泡腔内出现较多的组织细胞和中性粒细胞浸润,间质小血管周围出现淋巴细胞浸润,伏湿感染组肺泡炎症浸润现象较感染组加重。与正常组比较,伏湿组胸腺指数、脾指数、外周血WBC、Lym、Mono、NE、肺部CD4+表达、CD4+T细胞比例降低,血清RANTES、MIP-1β、IP-10水平升高(P<0.05,P<0.01)。与感染组比较,伏湿感染组胸腺指数和脾指数降低,外周血RDW-CV、RDW-SD、肺部CD4^(+)、CD8^(+)表达、CD4^(+)、CD8^(+)T细胞比例、血清RANTES、MIP-1β、IP-10水平升高(P<0.05,P<0.01)。结论 伏湿小鼠感染冠状病毒HCov-229E后表现为免疫失衡状态,免疫炎症损伤更严重。
柯宏霞秦聖乐许琪华王玉涛王新华
关键词:免疫功能中医证型中西医结合
以白藜芦醇为活性成分制备抗冠状病毒用药物的方法
本发明提供了一种以白藜芦醇为活性成分制备抗冠状病毒用药物的方法,包括以下步骤:确定所述抗冠状病毒用药物的目标剂型;确定白藜芦醇和其他辅料的处方量,以使白藜芦醇在靶细胞中的浓度水平为0.15mg/ml‑0.3mg/ml...
胡杰李翠魏焕莉许彦

相关作者

谭文杰
作品数:342被引量:789H指数:13
供职机构:中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所
研究主题:冠状病毒 丙型肝炎病毒 新型冠状病毒 呼吸综合征 人冠状病毒
崔晓兰
作品数:235被引量:1,367H指数:19
供职机构:中国中医科学院
研究主题:小鼠 病毒性肺炎 甲型流感病毒 抗病毒 流感病毒
赵荣华
作品数:104被引量:535H指数:12
供职机构:中国中医科学院
研究主题:小鼠 肝郁 脾虚 人冠状病毒 病毒性肺炎
郭姗姗
作品数:147被引量:916H指数:16
供职机构:中国中医科学院中医药信息研究所
研究主题:小鼠 病毒性肺炎 甲型流感病毒 肺指数 流感病毒
包蕾
作品数:86被引量:384H指数:12
供职机构:中国中医科学院中医药信息研究所
研究主题:小鼠 肺指数 人冠状病毒 病毒性肺炎 炎性因子