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通过LDLR和ApoE双基因敲除制备五指山小型猪动脉粥样硬化模型: 小型猪因心血管系统和解剖生理结构与人类十分相似,相比啮齿类动物更适合用于构建动脉粥样硬化等血脂代谢疾病动物模型。但传统的小型猪模型构建方法以高脂饲喂诱导和手术法为主,耗时长,操作复杂且成本较高,无法很好的模拟该类疾病的发...; 周佳; 关键词：APOE LDLR 五指山小型猪高胆固醇血症动脉粥样硬化

五指山小型猪近交系不同世代个体外周血红细胞aGal表达水平测定研究: 2023年; 目的探讨五指山小型猪近交系不同世代及其GGTA1/b4GalNT2基因敲除猪繁育后个体外周血红细胞aGal表达水平,为开发应用提供科学依据。方法利用异硫氰酸荧光素(FITC)分离技术,对五指山小型猪近交系不同世代及其GGTA1/b4GalNT2基因敲除猪繁育后代外周红细胞aGal表达水平进行了测定研究。结果组1近交系F_(27-28) 26头小型猪红细胞aGal免疫荧光反应百分数平均值为56.17%(16.2%~86.2%);组2 F_(24)8头小型猪平均值为65.39%(35.5%~99.2%);组3 F_(19-21) 21头小型猪平均值为82.15%(38.8%~89.4%)。组1与组3之间平均值差异有统计学意义(P<0.05);进一步分析发现组1与组2、组2与组3相比,个体红细胞aGal免疫荧光反应百分数代间分别下降3.07%和4.19%。组4中有8头GGTA1/b4GalNT2基因敲除猪繁殖后代和1头已知为GGTA1/b4GalNT2+hCD46+hCD55+hTBM五基因修饰纯合子猪的红细胞aGal免疫荧光反应测定值均为0.1%,与对照组结果一致。参与测定的8头GGTA1/b4GalNT2基因敲除猪繁育后代为纯合子个体。同胞兄妹F_(27)两头aGal低表达量为16.2%和19.5%,均低于GGTA1/b4GalNT2基因敲除杂合子后代猪平均值31.03%。结论随近交系推进其个体红细胞aGal表达量逐步降低;8头GGTA1/b4GalNT2基因敲除猪繁育后代为纯合子个体;近交系F_(27)两头为aGal低表达个体。; 冯书堂李莉李国平杨洁容王太平; 关键词：基因红细胞

高脂高糖饮食诱导五指山小型猪动脉粥样硬化模型肠道菌群的变化被引量：5: 2022年; 目的观察高脂高糖饮食致五指山小型猪动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)模型肠道菌群的变化。方法雄性五指山小型猪12只,按体重分为两组,即正常对照(NC)组和模型(AS)组,每组6只。NC组饲喂正常饲料,AS组饲喂高脂高糖饲料,连续饮食24周后,前腔静脉采血测定糖脂代谢等生化指标,同时进行葡萄糖耐量试验。实验结束后行安死术,观察体内脂肪沉积,并取主动脉血管行苏丹IV染色和腹主动脉血管行HE染色分别观察脂质沉积和组织病理学变化。取盲肠内容物进行16S rDNA测序分析肠道菌群的变化。结果与NC组比较,AS模型组血清总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、血糖(GLU)、果糖胺(FMN)菌明显升高(P<0.05,P<0.01),体重和体内脂肪沉积亦显著增加(P<0.01),同时AS模型组主动脉血管明显脂质沉积和AS病变。肠道菌群测序分析显示,与NC组相比,AS模型组肠道菌群α-多样性显著降低(P<0.05,P<0.01)。在门水平上,AS模型组拟杆菌门和放线菌门明显下降(P<0.05,P<0.01),变形菌门和厚壁菌门/拟杆菌门比值均显著升高(P<0.05)。在属水平上,AS模型组黑斯伯利亚菌属(Hespellia)、瘤胃球菌属(Ruminococcus)、毛螺菌属(Lachnospiracea_incertae_sedis)、假丁酸弧菌属(Pseudobutyrivibrio)、巴恩斯氏菌属(Barnesiella)等17个菌属的相对丰度显著下降(P<0.05,P<0.01),沙壤土杆菌属(Ramlibacter)、鞘氨醇杆菌属(Sphingorhabdus)、污水管杆菌属(Cloacibacillus)、草酸杆菌属(Oxalobacter)、鞘脂单胞菌属(Sphingomonas)、新鞘脂菌属(Novosphingobium)等11个菌属的相对丰度显著上升(P<0.05)。功能预测分析显示,脂多糖生物合成、脂多糖生物合成蛋白途径、初级胆汁酸的生物合成、花生四烯酸代谢等多条途径可能参与AS的形成。相关分析显示,TC、内中膜厚度、脂质沉积、果糖胺与草酸杆菌属、鞘氨醇单胞菌属、污水管杆菌属、梭�; 沈利叶潘永明徐雁云郁晨黄俊杰马全鑫陈民利; 关键词：肠道菌群动脉粥样硬化模型五指山小型猪

两种月龄近交系五指山小型猪脂肪间充质干细胞生物学特性的比较: 2021年; 背景:干细胞是再生医学研究的热点,影响干细胞生物学特性的因素很多,其中供体年龄是重要的影响因素之一。目的:观察两种月龄近交系五指山小型猪脂肪间充质干细胞生物学特性的变化,筛选最佳种子细胞来源。方法:以4月龄和12月龄近交系五指山小型猪脂肪间充质干细胞为研究对象,分别选取第3代细胞和第10代细胞,观察细胞形态,绘制细胞增殖曲线,检测细胞表面抗原、细胞周期、细胞凋亡情况,然后进行成骨诱导分化茜素红染色和成脂诱导分化油红O染色以及细胞衰老β-半乳糖苷酶染色等。结果与结论:①4月龄和12月龄细胞均呈漩涡状贴壁生长,表面标志物CD29、CD44和CD90表达均为阳性,CD8a、CD45和HLA-DR表达均为阴性;②4月龄和12月龄第3代细胞增殖能力均较强;第10代细胞,与4月龄相比,12月龄G0/G1期百分比增高(P<0.001),早期凋亡增加(P<0.001),而S期和G2/M期百分比显著下降(P<0.001);③4月龄和12月龄第3代细胞的体外诱导分化能力无显著性差异;12月龄第10代细胞的钙化结节率和脂滴率与4月龄相比显著降低(P<0.001);④4月龄和12月龄第3代细胞β-半乳糖苷酶几乎不表达;12月龄第10代细胞β-半乳糖苷酶阳性细胞与4月龄相比显著增加(P<0.001),且细胞形态变得更加扁平和肥大、折光性弱;⑤结果表明,4月龄近交系五指山小型猪脂肪间充质干细胞具有更强的增殖和分化能力,且细胞衰老活性更低,提示4月龄更适合用于自体移植的种子细胞。; 高元慧向杨曹卉王顺兰郑琳麟何浩伟张应爱张淑芳黄邓高; 关键词：干细胞脂肪间充质干细胞年龄分化衰老

一种封闭群五指山小型猪遗传质量检测的方法: 本发明公开了一种封闭群五指山小型猪遗传质量检测的方法，包括：五指山猪采集60份耳皮肤组织样，置于1.5mL消毒离心管中，‑20℃冰箱保存备用；五指山猪基因组DNA按照天根DNA提取试剂盒中的方法提取，溶于TE中，‑20℃...; 孙瑞萍魏立民晁哲刘海隆王峰郑心力黄丽丽

鉴定和选育PERV-pol基因缺陷型五指山小型猪新品系的方法: 本发明公开了一种鉴定和选育PERV‑pol基因缺陷型五指山小型猪近交系新品系的方法。本发明保护物质甲在制备试剂盒中的应用；所述试剂盒的功能为如下(a)或(b)：(a)鉴定猪内源性反转录病毒pol基因缺陷型五指山小型猪近交...; 马玉媛章金刚范瑞赵雄贾俊婷王延琳皇甫超济冯书堂

高脂环境下五指山小型猪和西藏小型猪冠心病相关血脂和炎症易感基因的表达: 目的观察在高脂环境下五指山小型猪、西藏小型猪血脂和炎症细胞的变化,分析冠心病相关血脂和炎症易感基因的表达.方法取雄性五指山小型猪、西藏小型猪各5 只,高脂饲喂连续6 个月,每月检测血脂和血常规,并检测饲喂前和饲喂6 ...; 郁晨刘志华潘永明徐孝平徐剑钦杨钦钦蔡兆伟陈民利; 关键词：五指山小型猪西藏小型猪血脂炎症

高脂环境下五指山小型猪和西藏小型猪冠心病相关血脂和炎症易感基因的表达被引量：5: 2019年; 目的观察在高脂环境下五指山小型猪、西藏小型猪血脂和炎症细胞的变化,分析冠心病相关血脂和炎症易感基因的表达。方法取雄性五指山小型猪、西藏小型猪各5只,高脂饲喂连续6个月,每月检测血脂和血常规,并检测饲喂前和饲喂6个月时外周白细胞中LDLR、LPL、PCSK9、ApoAV、5-LO、FLAP、MMP-9、ICAM-1、VCAM-1基因和蛋白的表达,及血清中CRP、TNF-α水平;并在饲喂6个月时取腹主动脉组织进行HE染色病理学检查。结果高脂饲喂后,两种小型猪TC、HDL-C、LDL-C水平均显著升高(P<0.01),西藏小型猪WBC、NEUT%、MONO%和五指山小型猪MONO%亦呈升高趋势(P>0.05);五指山小型猪TC、LDL-C水平高于西藏小型猪,而西藏小型猪的WBC、NEUT%和MONO%显著高于五指山小型猪(P<0.05,P<0.01),且西藏小型猪血清CRP和TNF-α水平显著升高(P<0.05),而五指山小型猪未见显著差异(P>0.05)。高脂饲喂6个月后,两种小型猪均出现明显的AS斑块,五指山小型猪LDLR、ApoAV mRNA和蛋白表达均显著降低(P<0.05,P<0.01),PCSK9、LPL mRNA表达显著升高(P<0.05,P<0.01);西藏小型猪LPL mRNA和蛋白表达均显著升高(P<0.01);五指山小型猪5-LO、FLAP、ICAM-1、VCAM-1 mRNA表达和5-LO蛋白表达均显著升高(P<0.05,P<0.01),西藏小型猪FLAP、MMP-9、ICAM-1、VCAM-1 mRNA和蛋白表达均显著升高(P<0.05,P<0.01),且西藏小型猪MMP-9、ICAM-1、VCAM-1 mRNA和蛋白表达均高于五指山小型猪,而5-LO mRNA和蛋白表达则五指山小型猪高于西藏小型猪。结论高脂环境下五指山小型猪、西藏小型猪均出现不同程度的血脂异常和炎症反应,两种小型猪的冠心病相关血脂和炎症易感基因存在明显异质性,其中,高脂诱导下五指山小型猪外周血白细胞对LDLR、PCSK9、5-LO表达较敏感,而西藏小型猪外周血白细胞中对LPL、ICAM-1、VCAM-1和MMP-9表达较敏感。; 郁晨刘志华潘永明徐孝平徐剑钦杨钦钦蔡兆伟陈民利; 关键词：五指山小型猪西藏小型猪血脂炎症

高脂环境下五指山小型猪和西藏小型猪冠心病相关血脂和炎症易感基因的表达: 目的观察在高脂环境下五指山小型猪、西藏小型猪血脂和炎症细胞的变化,分析冠心病相关血脂和炎症易感基因的表达。方法取雄性五指山小型猪、西藏小型猪各5只,高脂饲喂连续6个月,每月检测血脂和血常规,并检测饲喂前和饲喂6个月时外周...; 郁晨刘志华潘永明徐孝平徐剑钦杨钦钦蔡兆伟陈民利; 关键词：五指山小型猪西藏小型猪血脂炎症

GGTA1/β4GalNT2双基因敲除近交系五指山小型猪的建立被引量：6: 2019年; 目的:利用CRISPR/Cas9技术建立五指山小型猪近交系GGTA1/β4GalNT2双基因敲除克隆猪。方法:设计合成靶向猪GGTA1和β4GalNT2基因的单导向RNA(single guide RNA,sgRNA),以pX330质粒为骨架,分别构建GGTA1和β4GalNT2的Cas9打靶载体,转染至近交系五指山小型猪胎儿成纤维细胞(porcine fetal fibroblast,PFF)中,通过G418药物筛选和测序鉴定获得双基因敲除的单细胞克隆,然后利用体细胞克隆技术(somatic cell nuclear transfer,SCNT)获得双基因敲除的近交系五指山小型猪,并利用流式细胞技术检测克隆猪外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中αGal和Sd(a)抗原的表达。结果:成功构建GGTA1和β4GalNT2基因的Cas9/sgRNA表达载体,转染后获得双基因敲除的近交系五指山小型猪PFF细胞克隆9个。SCNT成功获得了10只五指山小型猪近交系双基因敲除的克隆猪,其PBMC无αGal和Sd(a)抗原的表达。结论:CRISPR/Cas9技术可以实现对猪GGTA1/β4GalNT2基因的编辑。本实验首次成功制备了GGTA1/β4GalNT2双基因敲除的近交系五指山型猪,为异种器官移植研究与应用提供了新的供体材料。; 李楚任雪洋李琳厉小雪金永张曼玲刘晓蕊熊强张立宁王盈李荣凤杨海元冯书堂戴一凡; 关键词：异种移植

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